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2017-05-06 发布于上海
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O-GlcNAc修饰对泛素化相关基因的调控.pdf

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O-GlcNAc修饰对泛素化相关基因的调控

目录第一章前言1 1.1 糖基化概述1 1.2 O-GlcNAc 修饰概述2 1.2.1 OGT 3 1.2.2 OGA 4 1.2.3 HBP 途径4 1.2.4 O-GlcNAc 修饰的检测方法5 1.2.5 O-GlcNAc 修饰与疾病6 1.2.6 O-GlcNAc 修饰与其他翻译后修饰之间的联系8 1.3 泛素化修饰概述8 1.3.1 泛素化过程9 1.3.2 去泛素化10 1.3.3 类泛素化10 1.3.4 泛素化与其他翻译后修饰之间的关系10 1.4 O-GlcNAc 修饰对蛋白泛素化的影响11 1.4.1 O-GlcNAc 修饰抑制了26S 蛋白酶体的ATPase 活性12 1.4.2 O-GlcNAc 修饰会减少某些底物蛋白的泛素化12 1.4.3 O-GlcNAc 修饰泛素化相关酶的并调节其功能13 1.4.4 某些蛋白受O-GlcNAc 修饰后间接影响其他蛋白泛素化14 1.5 Real-time Profiler PCR Array 15 1.6 研究内容及意义16 第二章材料与方法18 2.1 实验材料18 2.1.1 实验用菌株、载体、基因及细胞来源18 2.1.2 主要试剂及耗材18 2.1.3 主要仪器20 III 万方数据 2.1.4 引物21 2.2 主要溶液22 2.2.1 细胞培养相关溶液的配制22 2.2.2 大肠杆菌培养22 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳22 2.2.4 SDS电泳溶液23 2.2.5 银染溶液23 2.2.6 Western Blot 相关溶液的配制24 2.2.7 免疫沉淀相关溶液的配制24 2.3 实验方法24 2.3.1 提高总蛋白的O-GlcNAc 修饰水平24 2.3.2 PCR ARRAY 分析O-GlcNAc 修饰对泛素化相关基因的影响31 2.3.3 GlcN 处理下FBXW10 在转录和表达水平的调控33 2.3.4 FBXW10 的O-GlcNAc 修饰35 第三章实验结果36 3.1 提高总蛋白的O-GlcNAc 修饰水平36 3.1.1 HEK293T 细胞过表达sOGT、ncOGT 36 3.1.2 GlcN、PUGNAc 处理