蝇蛆壳聚糖急性毒性实验.docVIP

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蝇蛆壳聚糖急性毒性实验.doc

  蝇蛆壳聚糖急性毒性实验 作者:覃容贵 吴建伟 国果 付萍 【摘要】 目的观察蝇蛆壳聚糖的急性毒性反应。方法蝇蛆壳聚糖以最大浓度及最大给药体积的药液灌胃连续给药3次。连续观察14 d,记录小鼠毒副反应情况。蝇蛆壳聚糖腹腔注射给药1次,连续观察14 d,记录小鼠毒副反应情况。结果观察14 d,灌胃给药全部动物健存,小鼠体重与空白对照组差异无显著性,未见任何毒性反应。 计算 蝇蛆壳聚糖最大给药量为2 700 mg/ kg体重,相当于成人日用量的67.5倍。腹腔注射给药亦未见任何毒性反应。结论蝇蛆壳聚糖毒性较小。 【关键词】 蝇蛆壳聚糖 小鼠 急性毒性 甲壳素是地球上除纤维素之外最丰富的天然高分子聚合物。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰化产物,是一种具有重要开发价值的天然多糖物质。壳聚糖以其独有的特性日益成为全世界研究的热点,在医学、生物工程、化工、食品、化妆品、农业、环保等领域得到广泛深入的研究[1]。昆虫甲壳素也是甲壳素的重要来源之一。研究表明,干蛆中甲壳素的含量高于虾蟹中甲壳素的含量,因此更具有可利用价值[2]。本实验通过观察对实验动物一次给药后所产生的毒性症状及其程度,出现和消失的时间,死亡的发生率并计算出其最大给药量,从而推测蝇蛆壳聚糖对人的急性毒性的强弱。   1 材料与仪器   1.1 药物蝇蛆壳聚糖,自制。   1.2 动物 昆明种小鼠,清洁级,体重18~22 g,由贵阳医学院实验动物中心提供。   1.3 器材 电子 秤、量筒、1 ml注射器、灌胃针。   1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件,各组数据均以±s表示,各项指标组间差异的显著性比较采用Independent Samples T Test。   2 方法   2.1 灌胃的最大耐受量实验   2.1.1 动物分组 取小鼠40只,体重18~22 g,按体重随机分成两组,即蝇蛆壳聚糖给药组和蒸馏水对照组,每组20只,雌雄各半。以每笼5只饲养。   2.1.2 药物配制 蝇蛆壳聚糖临用前用蒸馏水稀释至所需浓度,以其能保持较好的流动性及可操作性,配制最大浓度为:33 mg/ml。   2.1.3 给药途径和容积 按每10 g体重0.3 ml药液,分别于上午8时、10时和12时灌胃给药,共连续给药3次。累计给药剂量为2700 mg/kg。给药前禁食12 h,正常饮水。给药量计算方法如下。   单次灌胃容积(ml)=〔动物体重(g) ×0.4〕 /10   单次灌入的药量(g)=单次灌胃容积(ml)×0.03   相当于人用量的倍数=(灌入的总药量×50×1 000)/(动物体重×22)   小鼠的最大耐受量=每只小鼠的耐受药量小鼠平均体重(20 g)×成人平均体重(50 000 g)成人每日用量   2.1.4 观察毒性反应 给药前后应观察体重、进食、进水的情况,密切观察异常毒性症状,观察症状包括:①行为活动:不安定、多动、发声;②神经系统反应:举尾、震颤、痉挛、运动失调、姿态异常;③自主神经系统反应:眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸;④死亡。每日记录体重、毒性反应和死亡情况,在给药第1天每隔30 min到1 h观察1次,以后每天观察并称体重1次,连续观察14 d,记录动物毒性反应及死亡分布情况。以体重变化、反应情况综合评价实验结果,以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量,推算出相当于临床用药量的倍数。   2.2 腹腔注射的急性毒性实验取20只小鼠, 体重18~22 g,雌雄各半。实验前12 h 禁食,不禁水,用配制浓度为30 mg/ ml的壳聚糖药液进行腹腔注射,每只小鼠注射量为0.3 ml(相当于900 mg/kg)。给药后即刻观察动物的反应情况,包括动物外观、行为活动、精神状态、食欲、大小便及其颜色、皮毛、鼻、眼、口有无异常分泌物以及死亡情况。在给药第1天每隔30 min到1h观察1次,以后每天观察,连续观察14 d,记录动物毒性反应及死亡分布情况。   3 结果   3.1 灌胃的最大耐受量实验   3.1.1 存活情况20只小鼠壳聚糖药液按900 mg/kg剂量灌胃后,无一死亡,继续观察14 d,全部存活。   3.1.2 体重变化药后14 d内小鼠活动、进食,排泄均正常,生长良好,毛色光亮,体重增加,无死亡。其平均体重均随实验时间的延长而增加,与相应时间的空白对照组相比,差异无显著性意义(Pgt;0.05) 。见表1和图1。   表1 小鼠经口服蝇蛆壳聚糖最大给药量后体重变化情况(略)   与空白对照组比较,▲Pgt;0.05;n=10   3.1.3 对脏器的影响观察期结束处死动物,尸体肉眼观察,壳聚糖给药组和对照组小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器外形、大小正常,切面均未见异常变

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