肝糖原的提取,定性以及定量实验教程.doc

生物化学实验报告 姓 名： 张子荣 学 号： 3150901080 专业年级： 2015级临床医学 组 别： 第五实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 实验日期 实验地点 合作者 指导老师 评分 教师签名 批改日期 小四号，宋体，1.5倍行距数字、英文用Times New Roman；实验目的实验原理CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2 2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O 2CuOH = H20 + Cu2O (红色) Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色) 3.肝糖原的定量 糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。 三、材料与方法以流程图示意鸡肝约1 g，剪碎 ＋5%CCl3COOH 1 ml 研磨至乳状 ＋5%CCl3COOH 3 ml 研磨成肝匀浆 全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min） 沉淀（弃去） 上清（取ml） ＋95%乙醇，混匀，静置10分钟 离心5分钟（4000 r / min） 上清（弃去） 沉淀 ＋蒸镏水1 ml 沸水浴2分钟，溶解沉淀 白瓷板孔穴中 糖原溶液1ml ＋浓HCl 5滴 加碘试剂2滴 加碘试剂2滴 沸水浴15分钟，冷却 糖原溶液2滴 ＋50%NaOH 5滴 呈色对比 糖原水解液2滴糖原水解液 ＋班氏试剂4滴 混匀 沸水浴2分钟，观察变化 沸水浴15min 冷却，全部转入100ml容量瓶中 加水至标线，仔细混匀，获得糖原提取液 取3支干净的试管，按下表操作： 试剂（ml） 空白管 标准管 样品管 蒸馏水 1.0 —— —— 标准葡萄糖溶液 —— 1.0 —— 糖原提取液 —— —— 1.0 0.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5 混匀，沸水浴10min，冷却。在722型或721型分光光度计620nm波长处，用空 白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）.计算： 肝糖原（g/100g肝组织）= X 0.05 X X X 1.11 注：由于我们组样品是稀释2倍的，所以后来结果要X稀释倍数 四、结果与讨论①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。≈ 8.675（g/100g） 分析以及结果讨论： 1.在鸡肝糖原的定性分析中，即 ①呈色反应中，样品溶液加入碘试剂后呈现明显的红褐色，说明样品液含有糖原； ②在样品液水解液与班氏试剂反应中，使溶液呈现砖红色；说明水解液含有葡萄糖（还原性糖） 综上，鸡肝中含有丰富的糖原。 2.在鸡肝糖原的定量实验中，我们组所得的肝糖原含量实验数据为8.675g/100g，而正常情况下为2-3g/100g，明显偏高。但在操作过程中称量0.15g鸡肝，加入KOH,水浴，加入蒽酮（换用加样枪结果依旧）均不存在操作问题，所以造成此结果的原因可能是： ①实验所用的鸡处于饱食状态，糖原大量储存缓解血糖浓度，因此使肝中的糖原明显多于一般情况下的鸡糖原含量； ②试剂误差：实验所用的试管可能由于上一组没有清洗干净，造成了部分糖原残留在试管导致我们组的结果偏高；另外，100ml容量瓶中含有少量白色固体难以清洗干净，也有可能是上一组留下的糖原未清洗干净。所以致使糖原测得值较高； 糖原试剂组 对照组，2滴碘试剂 +30% KOH 1.5ml 不分层的橘黄色溶液 不溶性杂质等物质 溶液 脂肪等物质 鸡肝漂浮物 沉淀 上清液