两株肿瘤细胞系HLAI类分子基因表达水平的鉴定及意义.docVIP

　　两株肿瘤细胞系HLAI类分子基因表达水平的鉴定及意义 作者：关德莹，沈晗，邵红伟，黄树林 【摘要】 目的 探讨两株常见肿瘤细胞系Hela细胞和BEL7402细胞HLAI类分子基因表达水平及其 影响 CTL反应性的可能意义。 方法 提取肿瘤细胞的基因组DNA，利用PCR反应在基因组水平鉴定HLAI类分子基因的拷贝数情况；提取细胞总RNA， RTPCR反应合成cDNA，利用PCR反应鉴定肿瘤细胞HLAI类分子在RNA水平的表达情况。结果 两株肿瘤细胞的HLAI类基因在基因组水平的拷贝数无明显下降；在RNA水平上，Hela细胞的HLAA、HLAB和HLAC基因均有表达，表达水平无明显下降，BEL7402细胞的HLAA和HLAC基因有表达，但HLAC基因表达水平降低，而HLAB基因未见明显表达。 结论 RNA水平上，部分HLAI类分子基因表达的降低或缺失推测可能是导致BEL7402细胞比Hela细胞出现CTL反应性下降的原因之一。 【关键词】 HLAI类分子；Hela细胞；BEL7402细胞；mRNA 　　Abstract:Objective To investigate the expression level of HLAI molecule genes in tor cell lines, Hela and BEL7402 and the possible significance of CTL reactions.Methods Genome DNA these tor lines for detecting the HLAI molecule genes′ levels by PCR.Total RNA from tolecule genes′expression on RNA level olecule genes levels did not decrease significantly on genome level.On RNA level, HLAA, HLAB and HLAC all expressed normally olecule genes′ expression of Hela cell line olecule genes′ expression in BEL7402 cell line olecule；Hela cell line ；BEL7402 cell line；mRNA 　　人类主要组织相容性复合物（MHC），又称为人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA )系统，位于第6号染色体短臂（6p21.31）约3.6Mb［1］，按功能差别可大致分为HLAI类分子和HLAII类分子两大类，其中HLAI类分子在机体的细胞免疫中发挥重要作用。 研究 发现，抗肿瘤免疫的核心是机体针对肿瘤的细胞免疫反应，其中CD8+CTL细胞必需依靠肿瘤自身HLAI类分子呈递的肿瘤抗原才能得以活化发挥杀伤作用。但由于肿瘤细胞的遗传不稳定性，会导致HLAI类分子的表达下降或缺失，是引起肿瘤免疫耐受形成的重要原因［2, 3］。因此，了解肿瘤细胞的HLAI类分子表达情况对研究如何打破免疫耐受，开展过继性细胞学 治疗 十分必要。在前期通过CTL杀伤实验的研究中发现，CTL对本室保藏的人宫颈癌细胞Hela的杀伤活性要高于人肝癌细胞株BEL7402(结果未发表)，为探讨此现象的发生是不是涉及到了肿瘤细胞HLAI类分子基因的表达变化，本文在基因组水平及RNA水平对两株肿瘤细胞的HLAI类分子基因的表达情况进行了鉴定 分析 ，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1．1 细胞 　　 　　Hela细胞、BEL7402细胞均为广东药学院生物制药研究所保藏，健康人外周血由广州市血液中心提供，用人淋巴细胞分离液分离出单个核细胞。 　　1．2 主要试剂与仪器 　　RPM1640培养基、胎牛血清购置Gibico公司；T4连接酶、MMLV反转录酶、Taq酶、dNTP、RNasEinhibitor、Oligod T均购自Fermentas公司；Trizol 0020购自Invitrogen公司；DEPC购自Sigma公司；DNA Marker DL 2000、100购自Biotech公司，基因组DNA提取试剂盒购自Pearl公司；PCR仪（MLV逆转录酶200 U，加无菌去离子水至终体积40 μL。混匀后42 ℃反应60 min，最后90 ℃5 min灭活MMLV活性，4 ℃保存合成的cDNA。 　　 　　扩增HLAA、B、C 3个基因及内参GAPDH基因的引物均由Invitrogen公司合成。