扩散法测定土壤无机氮15N丰度方法优化研究（.doc

扩散法测定土壤无机氮15N丰度方法优化研究( 温 腾1,2,3,4? 张金波1,2,3,4 蔡祖聪1,2,3,4 （1 南京师范大学地理科学学院，南京 　扩散法与质谱测定技术相结合，被广泛应用于环境、生态和农业领域中土壤、水等样品中无机氮15N的测定。为建立一套可快速、准确测定土壤无机氮15N的扩散培养体系，针对土壤样品无机氮量的变化特点，从培养温度、培养时间、试剂选择和用量等方面对扩散条件进行优化。结果发现，对于大部分无机氮浓度大于2 的土壤样品， 20 ml土壤提取液，在不小于250 ml的蓝盖瓶中，悬挂两张各滴加了10 μl 1 草酸的滤纸，加入0.g的MgO，25 下以140 r m的转速振荡培养24 h即可完成对样品中NH4-N的扩散与回收；换入2张加酸滤纸继续摇培48 h可基本去除残余的NH4-N；再换入2张加酸滤纸并加入0.1 g的戴氏合金振荡培养24 h即可。对于无机氮浓度低于2 的土壤提取液，需用50 ml提取液以上条件进行扩散培养即可保证测定结果的准确性。本方法大大缩短了扩散法所需的实验周期，实现在一份样品内同时完成NH4-N和NO3-N的扩散与回收，减少了样品的需要量，并通过优化MgO、戴氏合金(Devarda’s alloy)的用量减少杂质氮可能带来的污染。 　扩散；土壤铵态氮硝态氮N S153.1 A 15N稳定同位素示踪技术，已广泛应用于氮转化研究，无机态氮作为氮转化过程的重要形态，其15N丰度的测定特别是NH4-N和NO3-N)对陆地生态系统的氮循环研究尤其重要如何有效、快速、定量地从样品中提取出NH4-N和NO3-N是关键步骤[1-3]。早期提取分离土壤样品中的无机态氮一般采用蒸馏法，近年来扩散法已逐渐取代蒸馏法[4-8]。扩散法在一密闭容器内，加入MgO等碱性试剂使NH4+-N转化为NH3，并被加有酸吸收剂(如H2SO4、等)的滤纸所吸收，滤纸干燥后送至元素分析仪-同位素质谱联用仪上测定其15N丰度[3]；对于样品中的NO3--N，NH4+-N后，利用戴氏合金(Devarda’s alloy)将NO3-N还原为NH4-N，再扩散培养。与蒸馏法相比，扩散法适用于15N示踪样品，也适合自然丰度样品，测定的准确度和精确度高交叉污染，高温蒸馏引起的有机氮分解[4,9-11]。浓度不高，因土壤异质性，浓度差异较大，变化范围可为2 mg L-1~8 mg L-1。土壤无机氮浓度样品体积需适当[13]。NO3-N的测定需先去除样品中的NH4+-N，在二者15N丰度差异较大的情况下NH4+-N残留都会显著影响NO3--N[4,14]。Stark等[15]建议土壤样品开盖敞口静置去除NH4-N，但不但易污染样品，还降低NO3-N的回收率NH4+-N是关键。此外，扩散培养使用的MgO、戴氏合金等试剂均含不同程度杂质氮，对于土壤样品MgO和戴氏合金的使用量偏大杂质氮干扰明显试剂用量本研究针对土壤样品无机氮变化特点，从培养温度、培养时间、试剂选择和用量等方面对扩散培养条件进行优化，旨在建立一套可快速、准确测定土壤无机氮15N的扩散培养体系。 扩散法的操作步骤[17]。如图1所示，首先将回形针制成钩状固定到穿孔硅胶片上在的上将挂钩下取吸取瓶中，适当摇匀。将瓶放恒温摇床，，取出滤纸片[9]后，锡杯包样，通过同位素比值质谱仪(Thermo Fisher Scientific Delta V Plus)测定15N丰度，即样品中的NH4+-N的15N丰度。样品中NO3--N的测定则是在完成NH4+-N的扩散培养并去除残留NH4+-N后，加入0.3 g戴氏合金，摇培、干燥、包样和测定方法同NH4+-N。 图1 扩散法培养体系示意图 Fig. 1 Diagram of the diffusion method 培养温度和培养时间的优化 土壤样品的无机氮浓度一般为2～8 mg L-1，试验选用购自上海化工研究院的15NH4NO3标准样，配置成2、 mg L-1的 15NH4NO3标记液(NH4-15N丰度5 atom%; NO3--15N丰度 0.3663 atom%)，分成两组，其中一组直接使用标记液作为样品溶液，其对照组为同体积高纯水；另一组标记液中加入2 mol L-1 KCl以模拟土壤提取液，对照组为同体积2 mol L-1 KCl溶液。25、35和45 分别，酸吸收剂为10 μl 1 mol L-1 H2C2O4，MgO和戴氏合金用量均为0.3 g。 低氮浓度样品扩散体系的优化ml、50 ml和100 ml的15NH4NO3溶液(浓度NH4+-15N丰度5 atom%; NO3-15N丰度 0.3663 atom%)，在25 ℃下按1.1扩散培养48 h，其中100