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* 第十单元 生物技术实践 专题26 传统发酵技术与微生物的应用 考点二 微生物的应用 撬点·基础点 重难点 *
基础点1 微生物的实验室培养
(1)培养基
①概念:人们按照微生物对的不同需求,配制出供其生长繁殖的。
②成分
③分类
(2)无菌技术
①含义:指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。
②关键:。
营养物质
营养基质
防止外来杂菌的入侵
注意点 消毒和灭菌的辨析
项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高温的液体 化学药剂消毒法 用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 干热灭菌法 玻璃器皿、金属工具 高压蒸汽灭菌法 培养基及容器的灭菌
(3)纯化大肠杆菌以及菌种的保藏
①制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤:计算→称量→溶化→→ 。
②纯化大肠杆菌
a.原理:在培养基上将细菌稀释或分散成,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
b.方法:、。
③菌种的保藏
a.短期保存:上4 ℃保存,菌种易被污染或产生变异。
b.长期保存:中-20 ℃在冷冻箱中保藏。
2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
(1)菌种筛选:使用尿素是唯一氮源的选择培养基培养。
(2)统计菌落数目:常用方法有、显微镜直接计数法。
(3)细菌分离与计数的实验流程:土壤取样→配制→微生物的培养与观察→细菌的计数。
灭菌
倒平板
单个细胞
平板划线法
稀释涂布平板法
固体斜面培养基
甘油瓶
稀释涂布平板法
培养基
3 分解纤维素的微生物的分离
(1)纤维素酶
①组成:纤维素酶是一种复合酶,它包括。
②作用
(2)菌种筛选
①方法:。
C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶
刚果红染色法
②原理
→红色复合物红色消失、出现透明圈
即:使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基,根据来筛选纤维素分解菌。
是否产生透明圈
(3)筛选流程
土壤取样:富含的环境
↓
选择培养:用选择培养基培养,以增加纤维素分解菌的数量
↓
梯度稀释
↓
涂布平板:将样品涂布于含CR的鉴别纤维素分解菌的培养基上
↓
挑选产生透明圈的菌落:产生的菌落周围出现透明圈
纤维素
纤维素酶
重难点1 选择培养基和鉴别培养基的应用实例
类型 实例 选择
培养基 培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌 以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌 不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物 石油是唯一碳源时,可以抑制不能利用石油的微生物的生长,使能够利用石油的微生物生存,达到分离能消除石油污染的微生物的目的 培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物 鉴别培养基 伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈深紫色并带金属光泽)
2 微生物的筛选与计数
(1)筛选菌株
①原则:人为提供有利于目的菌株生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长。
②菌株筛选原理的比较
土壤中分解尿素的细菌 分解纤维素的微生物 a.选择培养基的成分:尿素作为唯一的氮源
b.鉴定方法:在培养基中加入酚红指示剂,若pH升高,指示剂变红,说明细菌能分解尿素 a.选择培养基的成分:纤维素作为唯一的碳源b.鉴定方法:刚果红染色法,即刚果红与纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈
(2)统计菌落数目的方法
①显微镜直接计数法
a.原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
b.方法:用计数板计数。
c.缺点:不能区分死菌与活菌。
②间接计数法(活菌计数法)
a.原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌
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