As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力和细胞周期的影响及机制探讨.docVIP

　　As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力和细胞周期的影响及机制探讨 【摘要】 目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对恶性淋巴瘤CA46细胞株增殖、活力和细胞周期的影响及机制探讨。 方法 磺酰罗丹明B(SRB)法观察不同浓度(0.625，1.25，2.5，5.0，10.0，20.0 μmol/L)As2O3分别处理24,48,72,96 h后CA46细胞系生长曲线，并 计算 上述各浓度As2O3处理72 h后CA46细胞系的细胞增殖抑制率;观察不同浓度(0.5，1.0，2.0 μmol/L)As2O3作用72 h后CA46细胞系的克隆形成率;流式细胞仪DNA倍体分析法探讨不同浓度(0.5，1.0和2.0 μmol/L)As2O3作用72 h对CA46细胞系细胞周期的影响;RTPCR法检测不同浓度(0.5，1.0和2.0 μmol/L)As2O3作用72 h后CA46细胞系p16基因mRNA的表达。同时设相应对照组进行比较。 结果 (1)与未处理组相比，各浓度As2O3均可明显抑制CA46细胞生长，且G0～G1期细胞逐渐增加，呈剂量依赖性。(2)未处理组细胞p16基因呈微弱表达，不同浓度As2O3作用72 h后，未处理组、不同浓度(0.5，1.0和2.0 μmol/L)As2O3处理组p16基因表达阳性条带灰度值与actin比值分别为(0.11±0.11)，(0.33±0.10)，(0.57±0.11)和(0.67±0.09)，各As2O3处理组p16基因mRNA表达明显高于未处理组，其差别有统计学意义(Plt;0.01)。 结论 As2O3可将细胞周期阻滞于G0～G1期，抑制肿瘤细胞的增长，其机制可能与诱导p16基因表达有关。 【关键词】 砷剂; 淋巴瘤; 细胞增殖; 肿瘤细胞，培养的; 细胞周期;基因，p16 三氧化二砷(As2O3)是近年国内首先发现并被成功用于急性早幼粒细胞白血病(APL)等多种恶性血液病的诱导分化 治疗 的药物;它还被用于治疗慢性粒细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤等血液肿瘤及神经母细胞瘤等实体瘤，取得了很好的疗效，其报道的作用机制大多与诱导细胞的凋亡和分化有关。笔者拟以恶性淋巴瘤细胞株CA46为受试细胞株，以As2O3为实验药物，研究As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力和细胞周期的影响及可能的机制。 　 　1 材料和方法 　　1.1 药物 选用As2O3(哈尔滨医科大学第一 医院 产品)，以磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)配成1 mmol/L储存液，使用前用RPMI 1640溶液稀释至所需浓度。 　　1.2 细胞系及细胞培养 选用CA46，人恶性淋巴瘤(Burkitt淋巴瘤)细胞株，为福建省血液病研究所冷冻保存，复苏后用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养至所用细胞处于对数生长期。 　　1.3 实验分组 取对数生长期的CA46细胞,调整细胞浓度1×105 mL-1,接种于培养瓶中。生长曲线及细胞增殖抑制率实验设7组，即未处理组，As2O3(0.625,1.25,2.5，5.0,10.0,20.0 μmol/L)处理组;克隆形成率、细胞周期百分率、RTPCR实验设4组，即未处理组，As2O3( 0.5，1.0,2.0 μmol/L)处理组。用药后常规培养,培养过程不换液。 　　1.4 As2O3对CA46细胞增殖、活力和细胞周期的影响 　　1.4.1 测定As2O3对CA46细胞增殖的影响 参照 　　Fig 1 Influence of As2O3 on CA46 cell line 　　2.1.2 As2O3抑制CA46细胞的克隆形成 由以上细胞增殖抑制实验结果得出72 h IC50约为1.1 μmol/L，取与之接近的1 μmol/L为克隆形成实验中心浓度，分别设2.0，1.0和0.5 μmol/L三个药物浓度组和未处理组进行比较。细胞克隆形成抑制实验表明：As2O3抑制CA46细胞的克隆形成，并呈剂量依赖性。不同浓度As2O3处理组克隆形成率均低于未处理组，未处理组及0.5，1.0，2.0 μmol/L As2O3处理组克隆形成率依次为(48.6±1.3)%，(37.1±0.8)%，(31.4±1.8)%、0和0，未处理组和各加药组比较，差别有统计学意义(Plt;0.05)。倒置显微镜下观察，未处理组细胞呈细胞团致密生长;加药组细胞生长分散、平铺。 　　2.2 As2O3抑制CA46细胞周期转换 随着As2O3浓度增加，不同浓度的As2O3加药组的G0及G1期细胞百分数高于未处理组，差别有统计学意义(Plt;0.01，表2,图2) 　　2.3 As2O3处理CA46细胞72 h后p16基因mRNA的表达 未处理组见微弱表达，0.5 μmol/L处理组可