豚鼠过敏试验与中性粒细胞吞噬功能实验〔小吞噬〕.pptVIP

中性粒细胞的吞噬作用 吞噬过程 1、无菌肉汤，白葡菌液，PBS缓冲液，瑞氏-姬姆萨染液。 2、注射器,解剖器材,玻片,显微镜等。 1.诱导：实验前1小时给小白鼠腹腔注射(头低位、曲形进针)无菌淀粉肉汤2ml，诱导浆液渗出。 2.注射：给小白鼠腹腔内注射白葡菌液1ml，轻揉腹部，让小鼠活动。 3.取样：注射后30分钟处死小白鼠，抽取腹腔液涂片。 4.干燥：室温或者放温箱中完全干燥标本。 5.瑞氏-姬姆萨染液染色： 滴加3滴A液于标本上，以完全盖住标本为宜，染色40秒。 滴加8滴B液，用洗耳球吹出微风使液面产生涟漪，使两液充分混匀，染色5分钟。 水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。 吸水纸拍干水分，干燥。 6.油镜镜检 小吞噬 涂片应薄厚均匀适中，避免过薄或过厚。 瑞氏染液染色时间不能过长以免染色过重。 附1：小白鼠的抓取和固定 通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，翻转后将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。 2.腹腔注射 腹腔注射：左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，酒精棉球消毒进针部位，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进 针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针 栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。 3.小白鼠的处死方法 颈椎脱臼法：用拇指和食指用力往下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓断离，动物立即死亡。 4：油镜使用镜油的原理 光线丢失 光线保留 5.油镜的使用方法 低倍镜找到视野后，下降载物台，滴加香柏油，调节物镜使用油镜镜头，从侧面观察，用“粗调节器”上升载物台至物镜镜头浸入油内（有些镜头可以伸缩）；从目镜观察，用粗调节器下降载物台，在此过程中可能会有比较清晰的视野一闪而过，此时，立即停止并调节“细调节器”倒回，调整后就可以看到比较清晰的视野 前后左右调节载物台，寻找满意视野 下降载物台，去载玻片，用擦镜纸和擦镜液擦油镜镜头 油镜找视野 油镜找细胞 收显微镜 低倍镜找视野 * 豚鼠生性胆小，当其受惊时，会在笼子内急转，易造成自伤。故抓取时要稳、准、快，不能太粗野；不能抓其腰腹部，防止造成肝破裂而死亡。 * 实验动物的处死方法很多，应根据动物实验目的、实验动物品种（品系）、以及需要采集标本的部位等因素，选择不同的处死方法。无论采用哪一种方法，都应遵循安乐死的原则。安乐死是指在不影响动物实验结果的前提下，使实验动物短时间无痛苦地死亡。处死实验动物时应注意，首先要保证实验人员的安全；其次要确认实验动物已经死亡，通过对呼吸、心跳、瞳孔、神经反射等指征的观察，对死亡作出综合判断；再者要注意环保，避免污染环境，还要妥善处理好尸体。 一、颈椎脱臼处死法 ??? 此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。 二、断头处死法 ??? 此法适用于鼠类等较小的实验动物。操作时，实验人员用左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。 三、击打头盖骨处死法 ??? 主要用于豚鼠和兔的处死。操作时抓住实验动物尾部并提起，用木锤等硬物猛烈打击实验动物头部，使大脑中枢遭到破坏，实验动物痉挛并死亡。 四、放血处死法 ??? 此法适用于各种实验动物。具体做法是将实验动物的股动脉、颈动脉、腹主动脉剪断或剪破、刺穿实验动物的心脏放血，导致急性大出血、休克、死亡。 ??? 犬、猴等大动物应在轻度麻醉状态下，在股三角做横切口，将股动脉、股静脉全部暴露并切断，让血液流出。操作时用自来水不断冲洗切口及血液，既可保持血液畅流无阻，又可保持操作台清洁，使实验动物急性大出血死亡。 五、空气栓塞处死法 ??? 处死兔、猫、犬常用此法。向实验动物静脉内注入一定量的空气，形成肺动脉或冠状动脉空气栓塞，或导致心腔内充满气泡，心脏收缩时气泡变小，心脏舒张时气泡变大，从而影响回心血液量和心输出量，引起循环障碍、休克、死亡。空气栓塞处死法注入的空气量，猫和兔为20~50ml，犬为90~160ml。 六、过量麻醉处死法 ??? 此法多用于处死豚鼠和家兔。快速过量注射非挥发性麻醉药（投药量为深麻醉时的30倍），或让动物吸入过量的乙醚，使实验动物中枢神经经过过度抑制，导