哺乳动物Shaker家族电压依赖型钾通道的晶体结构.docVIP

哺乳动物Shaker家族电压依赖型钾通道的晶体结构 电压依赖型钾通道，顾名思义，当膜电压发生变化时，会运输钾离子穿越细胞膜，从而通过控制细胞形态以及动作电位的频率来调节神经元的兴奋性。本文章报道了一个分辨率为2.9埃的哺乳动物的Kv通道（Kv1.2通道）晶体结构，这个通道属于Shaker型钾通道家族成员。该通道与一个氧化还原酶的β亚基形成复合结构。在细胞原始环境下，这一氧化还原酶β亚基可以调控哺乳动物的Kv通道。侧向的静电性能以及T1域和β亚基的位置与门控失活的电生理学研究是吻合的钾通道可能受到β亚单位的调控。 电压依赖型钾通道是电压依赖型阳离子通道家族的成员，这个家族包括钾通道，钠通道以及钙通道。这些通道普遍存在于广阔的生物王国中。在真核细胞中，他们与其他离子通道相互协作共同参与或调控细胞的电生理活动。这种电生理活动在电敏感细胞如神经元以及肌肉细胞以及非电敏感细胞的许多生理活动中都发挥重要作用。在典型的易兴奋细胞神经元细胞中，Kv通道帮助膜电压在动作电流后回复到静息电位，并且能够调整动作电流的形状以及控制动作电流的激发率。 我们大部分对于Kv通道的了解来源于对黑腹果蝇Shaker钾通道以及在哺乳动物中其他家族成员的研究。由于Shaker家族通道可以轻松的在非洲爪蟾蜍卵母细胞中表达，因而被广泛的用于电生理学研究。但是不同的是，我们对于钾通道结构的了解却仅限于原核生物的研究。这是因为它们可以大肠杆菌（Escherichia coli 真核生物Kv通道在许多方面都和原核生物有相似之处。由于选择性过滤器非常保守，我们猜测其结构在所有Kv通道中本质上都是一样的。‘孔螺旋形成漏斗形，选择性过滤器位于接近胞外的宽口端’这一说法被认为是一个保守的特征。然而，除了它们保守的孔以及一些调控通道开放的特定的域，真核生物Kv通道有一些与众不同的特征。例如，在S6内部螺旋（在选择性滤器细胞内端），有一段高度保守序列Pro-X-Pro（X可以是任意的氨基酸），存在于Shaker家族Kv通道，但是并不存在于原核生物Kv通道。突变实验显示这一段序列对于门控相当重要，但是原因还不清楚。由此可以推测Shaker Kv通道的内部孔腔（由S6内螺旋围成）与原核生物不相同。 Shaker家族Kv通道对于真核生物来说是特有的，不存在于原核生物中，这有利于我们了解真核生物Kv通道与原核生物的区别。在第一个跨膜螺旋S1之前，N端在细胞内形成T1域。分别来自于四个Shaker Kv通道亚基的四个T1域在细胞膜内表面形成一个四聚体。四聚体处在通道孔腔与细胞质之间的入口处，这意味着跨膜通道需要与细胞质通讯从而让钾离子自由的在细胞与跨膜通道之间流动。这一入口不仅足够钾离子通过，而且在一些Shaker家族Kv通道中还能允许通道N端进入介导门控失活。 T1域在真核生物Kv通道中充当β亚基的对接平台。β亚基形成一个与醛固酮还原酶有关的四聚体蛋白，这是一种基于NADPH的具有α-β桶结构的氧化还原酶。β亚基四聚体以及β-T1复合体的晶体结构显示酶活位点包括一个NADP+辅因子以及氢转移催化残基。但是由于β亚基的功能未知，所以其活性位点还是个谜。它是一个被Kv通道调控的酶还是作为Kv通道的传感器帮助细胞通过氧化还原状态影响膜的电生理活动。差不多所有的在哺乳动物神经系统中的Shaker家族Kv通道都有这些β亚基氧化还原酶。 实验证据表明在真核生物以及原核生物中电压依赖的门控本质上是相似的，而且它们的电压传感器的结构是类似的。但是关于Shaker家族Kv通道的结构研究可以提示更多的信息。原核生物Kv通道KvAP的结构揭示完整的磷脂双分子层细胞膜对于保证电压传感器正确的导向孔有重要作用。但是在分离通道的过程中，细胞膜被去除。这使得推导电压传感器和孔之间的电偶联的所有尝试都变得含糊不清。Kv通道的电压传感器被细胞内的T1域束缚，以维持它和孔脆弱的作用。 Kv1.2-β亚基复合体的结构。T1域和β亚基的结构很严格，而且在β亚基层被包装的很好。孔位于细胞膜上，相对来说比较自由，电压传感器与周围的蛋白分子作用少，自由度最高。β亚基，T1域，孔以及S4-S5 linker的结构模型基本完整，保存了大部分侧链。电压传感器的四个片段（S1-S4）构建起的结构没有S1-S2，S2-S3以及S3-S4之间的环。由于这一区域侧链的电子密度最弱，所以先前对于KvAP结构的了解能够帮助构建电压传感器。T1域与S1之间的连接是用两个甘氨酸螺旋构建。T1-S1 linker像一个垫片一样将跨膜孔道与通道胞内部分隔开。 孔螺旋与电压传感器螺旋之间以一种不寻常的方式关联。电压传感器与相邻亚基的孔锁在一起。从细胞外俯视时可以看得更清楚。见下图。电压传感器与孔之间依靠S4-S5 linker连结，S4-S5 linker与细胞内表