G+球菌的鉴定要点.pptVIP

革兰氏阳性球菌的种类 1、葡萄球菌属 2、链球菌属 3、微球菌属 4、肠球菌属 5、气球菌属 6、孪生球菌属 7、创伤球菌属 8、乏养球菌属 一、革兰氏阳性球菌的基本特征： 在血平板上生长，但在中国篮、麦康凯平板上不生长，提示为革兰氏阳性球菌。 二、革兰氏阳性球菌的基本鉴定试验： 1.触酶试验是鉴定革兰氏阳性球菌的重要试验，任何G+球菌必须先做触酶试验，是鉴别葡萄球菌与链球菌的初步依据 2.凝固酶试验是鉴定葡萄球菌的重要试验 三、作为推测性鉴定的重要试验 1、菌落特征 溶血：血平板上菌落周围的溶血有助于一些 细菌的初步鉴定 α溶血: 菌落周围有一草绿色的环，疑似肺 炎链球菌和草绿色链球菌。 β溶血：在菌落周围有一完全溶血环，疑似金葡菌和溶血性链球菌。如化脓性链球菌周围产生宽阔清晰的溶血环，无乳链球菌产生一个狭窄的溶血环。 2、镜下形态 （1）G+球菌、葡萄状、单个或成双排列的 疑似葡萄球菌 （2） G+球菌、球杆状、链状（长短不一） 排列的疑似链球菌 （3） G+球菌、矛头状、成双或短链状排列 的疑似肺炎链球菌 （4） G+球菌、成簇、四联状排列的疑似微 球菌属等 3、触酶试验 触酶试验阳性的G+球菌：葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属、动球菌属、克氏考克菌属、差异球菌属等 触酶试验阴性的G+球菌：链球菌属、肠球属、乏养菌属、气球菌属、狡诈球菌属、费克篮姆菌属、孪生球菌属、戈鲁毕卡菌属、创伤球菌属、乳球菌属、明串珠菌属、足球菌属等 3、触酶试验 （1）原理：具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。 （2）方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落置于洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液一滴，观察结果。 （3）结果判断：在5秒内释放大量的气泡为阳性。 4、血浆凝固酶试验 （1）原理：金葡菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中纤维蛋白原变成纤维蛋白附着于细菌表面上，发生凝集，用玻片法测出。另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶，能使凝固酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固，可用试管法测出。 （2）方法： a.玻片法：取血浆和生理盐水各一滴分别滴到清洁玻片上，挑去待检菌落分别与血浆及盐水混合，如血浆中出现明显凝集颗粒而盐水中无自凝现象者为阳性。 b.试管法：取试管两支，分别加入0.5ml（经生理盐水1：4稀释）的血浆，挑取菌落数个加入测定管充分研磨混匀，用一只阳性菌株加入对照管，37℃水浴3-4小时。血浆凝固者为阳性。 血浆凝固酶试验---玻片法 血浆凝固酶试验---试管法 (3)意义 凝固酶试验阳性的葡萄球菌：金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌、施氏葡萄球菌聚集亚种、猪葡萄球菌（11~89%阳性） 凝固酶试验阴性的葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、木糖葡萄球菌、头状葡萄球菌、沃氏葡萄球菌等10余种。 5、CAMP试验 原理：B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子，可促使金葡菌β 溶血素的活性，故在血平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。其他链球菌一般不产生CAMP因子，无此现象。 方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条横线，再于该直线的垂直平分线处用被检菌接种一条垂直短线，两线相距3-5mm左右，35℃24小时观察结果。 结果观察：在被检菌接种线与金葡接种线之间有一个箭头形或半月形透明溶血区为阳性，可推断为B群链球菌。无溶血区为阴性。 意义：作为B群链球菌的鉴定指标之一 6、杆菌肽敏感试验 原理：A群链球菌对杆菌肽非常敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药，故此试验可鉴别A群链球菌。 方法：将被检链球菌，密涂于血平板上，将杆菌肽纸片贴于血平板表面，35℃24小时观察结果 结果判断：在杆菌肽周围出现明显抑菌环 ＞10mm为阳性，则被推断为A群链球菌 ＜ 10mm为阴性，为其他群的链球菌。 7、奥普妥辛实验（OP试验） 原理：Optochin（乙基氢化去甲奎宁）干扰肺炎链球菌叶酸的合成，可抑制其生长，其他链球菌如草绿色链球菌对其不敏感。 方法：将待检的a溶血的链球菌均匀的涂布于血平板上，贴放Optochin纸片（含药5mg)35℃孵育18-24小时，观察抑菌圈的大小。 结果判断：抑菌圈＞14mm为肺炎链球菌，无或见很窄的抑菌圈为草绿色链球菌。 意义；鉴别肺炎链球菌与草绿色链球菌。 主要的G+球菌