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Cx43磷酸化及其与ZO-1、Src相互作用的研究进展 　　【关键词】 Cx43磷酸化；ZO-1；Src；缝隙连接 　　文章编号：1003-1383(2011)04-0496-03 中图分类号：R 33 文献标识码：A 　　 doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2011.04.049 　　缝隙连接(Gap Junction， GJ)是沟通相邻细胞胞质的细胞间通道，介导缝隙连接细胞间通讯（GJIC)，缝隙连接蛋白(Connexin，Cx)是实现GJIC的结构基础，主要通过对细胞信号的传导来发挥作用。近年来随着分子生物学发展，有学者认为这种传导主要由Cx43完成［1］。在蛋白翻译后的加工中，蛋白质磷酸化是调节细胞增殖的基础，同时也是调控细胞信号转导的主要方式。研究表明，Cx43磷酸化对GJ通道的组装和决定通道传导特性起重要的作用，影响疾病的发生发展［2］。有学者对后发性心肌梗死研究发现，Cx43与Src、紧密连接蛋白-1(Zonula occludens-1，ZO-1)之间存在密切相关，它们相互作用对心肌细胞缝隙连接的结构和功能有重要影响［3］。本文对近年来Cx43磷酸化特点、磷酸化对缝隙连接通讯的影响及其与相关蛋白Src、ZO-1相互作用的研究进展进行综述。 　　 一、Cx43磷酸化特点 　　 Cx43是由含2768 碱基对的3条互补脱氧核糖核酸所编码的，由387个氨基酸组成的一种分子量约为43KD的磷酸化连接蛋白，包含四个跨膜区域，一个胞内环( CL)和两个胞外环（EL1-EL2 ）构成。两个二硫键连接胞外环EL1和EL2，便于对接及识别相应的连接蛋白。目前研究发现Cx43按照传统的途径合成，即转录后首先在内质网合成，然后通过细胞内运输系统，转运至高尔基复合体进行磷酸化等一系列翻译后修饰，最后在细胞膜上聚集形成GJ。其磷酸化主要发生在丝氨酸(Serine，Ser)、酪氨酸和苏氨酸等氨酸残基上，从而为Cx43的聚集和缝隙连接的形成提供保障。采用磷酸氨基酸序列分析发现，大多数的磷酸化事件发生在Cx43蛋白的丝氨酸位点［4］，而当PP60src激活时，也可以出现酪氨酸的磷酸化［5］。Cx43磷酸化区域主要是其C末端，而它在胞内袢没有丝氨酸残基，目前没有研究报道Cx43的N末端出现磷酸化。在细胞培养和组织研究中显示Cx43的半衰期较短，只有几个小时［6］，提示这么短的半衰期意味着有较高水平的转录后调控。实际上，既往有学者的研究已经发现，在稳态细胞的生命周期中Cx43 随时发生着不同的磷酸化［4，5］。在培养的成纤维细胞中研究显示Cx43 的磷酸化是发生在其抵达胞膜以前，最初的磷酸化时间出现在其合成早期的15 min内［6］。这些早期的磷酸化事件功能参与了Cx43从内质网到组装成连接子的转运过程，或者Cx43连接子从反面高尔基网络离开。在Cx43合成过程中，发现有非磷酸化Cx43形式存在，提示这些早期的磷酸化事件可能是暂时性的，或者对于其转运至胞膜不是必要的。研究表明在非细胞连接处的Cx43 并不一定进行磷酸化，但是已有大量研究证实缝隙连接处的Cx43主要磷酸化成P2形式，而且不溶于Triton X-100。这些研究表明Cx43有磷酸化和非磷酸化两种形式存在，但是主要以哪一种形式存在为主及哪一种形式功能占优势，目前尚未见有资料报道。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现，Cx43有多个电泳条带亚型，即迁移速度较快的非磷酸化的Cx43亚型(P0或者NP) 和迁移较慢的磷酸化的Cx43 亚型（P1和P2）。而用碱性磷酸酶处理后发现原P1和P2条带迁移到P0条带位置，提示Cx43磷酸化与共价修饰有关［4，5］。 　　 二、Cx43磷酸化对缝隙连接通讯的影响 　　 磷酸化是蛋白转录后加工的一种修饰形式，它是调控细胞信号转导的主要方式，通过蛋白激酶和蛋白磷酸化酶的相互作用，控制着许多细胞内过程。Cx43是Cx蛋白家族最主要的成员之一，它存在于大多数组织细胞中，其磷酸化状态直接影响GJIC的功能。有报道表明一些植物性雌激素能抑制细胞GJIC功能，并引起Cx43的磷酸化状态的改变。Cx43磷酸化后能够影响在细胞膜上的组装、降解及GJ介导GJIC。有证据表明，Cx43一些位点的磷酸化可抑制单通道的开放，从而降低细胞间的GJ功能。有研究发现，Cx43 S368位点磷酸化，导致血管平滑肌细胞GJ通道关闭，使得通透性减弱［7］，Cx43 S368-C末端磷酸化增加，心律失常得到改善［8］，Cx43的酪氨酸位点磷酸化， GJ通道功能降低［9］。Cx43的C-末端含有多个Ser/Thr 和Tyr 残基，其中的许多位点能与其他调节蛋白相互作用，特别是其磷酸化状态受多种蛋白激酶和/或蛋白磷酸酶调节，引起Cx43构象改变并最终影响