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——四种常见流式实验讲解;1. Guava easycyte 8HT 操作流程2. 四种常见流式细胞术;1. Guava easycyte 8HT 操作流程 ——Incyte模块;1.1 清洗;1.2 样本采集;1.3 分析
见具体实验的分析。
1.4 关机;1.5 日常维护;微珠:10μL(用前震荡混匀)
Buffer:190μL;2. 四种常见流式细胞术;凋亡启动;2.1.1 PI单染法;优缺点:;2.1.2 Annexin-Ⅴ-PI双染法;结果分析;荧光交叠;荧光补偿;优缺点:;2.1.3 线粒体膜电位法;结果分析;2.2 DNA含量检测与周期分析;2.2.1 DNA倍体分析——PI染色法;结果分析 ——Guava原软件分析;在用第三方软件分析之前,请将流式结果按如下所示导出。;结果分析 ——Modfit软件分析;结果分析 ——Modfit软件分析;图片拷贝:直接Ctrl+C;结果分析 ——Flowjo软件分析;2.2.2 S期特异性检测;2.2.3 M期特异性检测;2.3 胞内活性氧水平的检测与分析;注意事项:;(1)阴性细胞群(峰)和阳性细胞群(峰)分群明显
;(2)样本管与阴性对照管峰形重叠
;样本管峰形整体右移。在排除非特异性染色的情况下(如设置严格的对照、调节抗体浓度等),方能进行分析。
分析原则:
不可根据阴性对照界定阴性置信区;
可记录平均荧光强度,不可记录阳性细胞百分率。;(3)同时出现弱阳性峰与强阳性峰的组合图形
;2.4 细胞表面分子的检测与分析;2.4.1 免疫学检测;数据分析;2.4.2 肿瘤干细胞分析;MCF-7 negative control MCF-7 CD24 MCF-7 CD44 MCF-7 CD24/CD44;侧群细胞;细胞周期特异性凋亡检测:AnnexinⅤ染色后用透膜固定剂固定,然后加入PI进行DNA染色。;报告基因与细胞周期结合;报告基因与细胞凋亡结合;ROS与细胞活性结合——DCFH/PI染色法;干细胞分析与细胞活性结合——表面标志物抗体/PI染色法
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