2016-2017学年度人教版选修1血红蛋白的提取和分离课件（28张）.ppt

新华网首尔１２月２９日电（记者 干玉兰）韩国浦项工业大学科学家２９日宣布，他们已查明可抑制艾滋病病毒感染的“ＴＲＩＭ５”蛋白质核心部分的结构。 浦项工业大学生物科学系教授吴秉夏等人，当天公开了“ＴＲＩＭ５”蛋白质内核心部分“Ｂ３０．２／ＳＰＲＹ”的三维分子结构，并称已弄清楚这一结构的正确位置及它与其他结构之间的相互作用。研究成果发表在最新一期《分子细胞》杂志上。 2００４年英国《自然》杂志曾刊登论文说，“ＴＲＩＭ５”蛋白质可有效抑制艾滋病病毒的感染。此后，世界各地的很多科学家开始研究“ＴＲＩＭ５”蛋白质的结构，但到目前为止尚未有人宣称取得突破性进展。 我国对蛋白质的现阶段研究 我国独立主持国际“人类肝脏蛋白质组计划”，参加国际人类蛋白质组研究计划中的“大规模抗体制备”项目 1、使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中?? （??? ） * 2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成 这标志着进入了后基因组和蛋白质组时代。 人类基因组：指DNA分子所携带的全部 遗传信息。 蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。主要是对蛋白质功能的研究 专题5 DNA和蛋白质技术 课题3：血红蛋白的提取和分离 思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 一. 基 础 知 识 蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性（理化性质）的差异, 来分离不同种类的蛋白质。 (如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等) （一）凝胶色谱法 1、概念： 也称分配色谱法，根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 2、凝胶的基本知识： 凝 胶 形态： 组成： 结构： 微小多孔的球体 大多是由多糖类化合物形成 如葡聚糖、琼脂糖 内含许多贯穿的通道 ①大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道； 3、凝胶色谱法的原理 ③分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 ②当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢； 4、分离过程 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 练习巩固 （二）缓冲溶液 1.概念: 在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强 酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不变的混 合溶液。 能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响， 维持PH基本不变。 2.作用: 3.缓冲溶液的配制: 通常由1－2 种缓冲剂溶解于水 中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。 4.提问：在本课题中使用的缓冲液是:__________ , 其目的是: 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证 血红蛋白的正常结构和功能，便于观察和研究。 磷酸缓冲液 （三）电 泳 1、概念： 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2、原理： ◆ 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 ◆ 许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具 有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带 上正电或负电。 ◆ 在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 电泳原理图解 原理(p66): SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳 SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 为什么提取血红蛋白用哺乳动物