实验五 叶绿体的在分离.docVIP

 山东大学实验报告 2013年3月12 日 姓名 李某某 系年级 同组者 科目 细胞生物学实验 题目 叶绿体的分离、纯化与荧光观察 学号 201100140000【实验目的】 1、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法； 2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。 【实验原理】 1.叶绿体分离原理 匀浆破碎细胞，利用差速离心方法分离等渗介质中的悬浮颗粒，收集类叶绿体大小的颗粒，得到叶绿体。 差速离心：颗粒在离心场中的沉降速度取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的密度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和颗粒大小不同的颗粒其沉降速度不同，先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 叶绿体的分离应在等渗溶液中（0.35mol/L的氯化钠或0.4mol/L的蔗 糖溶液）进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。 分离过程最好在0~5℃的条件下进行，如果在室温下，要迅速分离和观察。 2、差速离心 特点：1.介质密度均一； 2.速度由低到高，逐级离心。 用途：分离大小相差悬殊的细胞核、细胞器。 沉降顺序：细胞核—线粒体—溶酶体与过氧化物酶体—内质网与高尔基体—核蛋白体。 可将细胞器逐步分离，常需进