寨卡病毒实验室检测技术方案.pdf

附件1 寨卡病毒实验室检测技术方案 寨卡病毒(Zika Virus)属黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒 属（Flavivirus），呈球形，直径约为 40-70nm，有包膜。基 因组为单股正链 RNA，长度约为 10.8Kb，可分为亚洲型和 非洲型两个基因型。 寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM 抗体检 测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他 病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检 测。 一、检测对象 （一）疑似和临床诊断病例。 （二）伊蚊成蚊和幼虫。 二、样本采集、保存和运输 （一）病例标本采集。 对怀疑感染寨卡病毒的患者，推荐采集血清标本开展检 测。 用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血 5mL，及时分离 血清，分装 2 管，保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内， 标记清楚后低温保存，其中 1 管用于现场实验室检测，1 管 用于上级疾病预防控制机构复核。 对病例应尽可能采集双份血液标本，两份标本之间相隔 1 14 天为宜，住院病例可于入院当天和出院前 1 天各采集一份。 （二）蚊媒标本采集。 疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫，分类鉴定后，填写媒介 标本采集信息表，按照采集地点分装，每管 10-20 只。 （三）标本保存、运送。 如标本能够在 24 小时内开展实验室检测，应将标本置 于 2-8℃保存；如能在 7 天内开展检测，应将样本置于-20℃ 保存；如需保存 7 天以上，应将样本置于-70℃以下。 标本运送时采用低温冷藏运输，避免冻融，样本运输应 遵守国家关于三类病原体的相关生物安全规定。 三、检测方法 寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM 抗体检 测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他 病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检 测。 开展蚊媒寨卡病毒检测时，对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进 行病毒核酸检测。 开展寨卡病毒实验室检测时，应同时考虑登革病毒和基 孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测 应按照相应的技术指南开展。 （一）临床标本检测。 1 ．病原学检测 病原学检测主要适用于急性期血液标本，一般认为发病 2 7 天内检测阳性率高。 （1）核酸检测：采用荧光定量 RT-PCR 方法，是目前 早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。 （2）病毒分离：将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺 乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养，出现病变以后， 用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病 毒分离。 2 ．血清学检测 （1）血清特异性 IgM 抗体：发病 3 天后可检出病毒特 异性 IgM 抗体，但发病 7 天后检出率高。可采用 ELISA、免 疫荧光等方法检测。IgM 抗体阳性，提示患者可能新近感染 寨卡病毒，但寨卡病毒 IgM 抗体与登革病毒、黄热病毒和西 尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应，易于产生假阳性。 （2）中和抗体：采用空斑减少中和试验方法检测。患 者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈 4 倍及以上升 高，且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染，可以确诊。 （二）媒介标本检测。 1 ．标本处理 将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每 10～20 只为一份进行研磨处理。 2 ．病毒核酸检测 用 RT-PCR 的方法进行寨卡病毒核酸检测 3 ．病毒分离