电泳分离法左瑾瑜精要.pptVIP

9.2电解分离法 9.2.1基本原理 电解是一种借外电源的作用使化学反应向着非自发方向进行的过程。 计算电解时所需电压，首先需要知道两电极所发生的反应，来计算每一个电极的电极电势，从而计算出电解时所需施加的电压。 例如：用铂电极在0.5mol/L的H2SO4中电解0.100mol/L的CuSO4时， 阴极反应为 阳极反应为 根据25℃时的能斯特方程可以计算出阴极的电势为 而对于放出氧的阳极，则有 所以，该电解池所需理论分解电压为 实际过程中，外加电压一定要大于理论分解电压，电解才能进行。 两方面原因：1、电解池内的电解质溶液及导线的电阻所引起的电压降；2、电极的极化作用。 根据极化产生的原因不同，可将极化分为浓差极化和电化学极化。 浓差极化：由于电解过程中电极表面附近溶液的浓度和主体溶液的浓度产生差别引起的。 减小浓差极化的方法：增大电极面积、减小电流密度、提高溶液温度、强化机械搅拌。 电化学极化：由于电极反应迟缓所引起的。 电解过程中，外加电压（V）电极电势及电解池内阻之间的关系为 在阴极上还原的不一定是阳离子，阴离子同样也可以在阴极还原。 在阴极上，析出电位越正者越易还原；在阳极上，析出电位越负者越容易氧化 9.2.2电解分离法的分类和应用 1、控制电位电解分离法 2、控制电流电解分离法 3、汞阴极电解分离法 4、内电解分离法 9.3 电泳分离法 9.3.1分离原理 在一定实验条件下，各种带电粒子的μ值是一个定值。 根据离子迁移率的定义，也可以写成 其中V是外加电压；L是两电极间的距离；t是电泳时间；s是带电质点在此时间内迁移的距离。 假设A和B两种带电粒子的迁移率分别为μA和μB，在电场作用下，经过时间t后，它们的迁移距离为 两种粒子迁移距离差为 根据上述公式可知，影响带电粒子分离程度的因素是： 1、带电粒子的迁移率 带电粒子的迁移率正比于它所带的电荷。因此，阳离子与阴离子最容易分离，因为它们的迁移方向相反。迁移率与离子半径成反比，溶液中共存的两种离子，其所带电荷及半径相差越大，越容易用电泳法分离； 2、电解质溶液的组成 电泳是在一定电解质溶液中进行的，组成不同，溶液粘度不同，导致离子迁移率不同。 3、外加电压梯度 电压梯度是指每厘米的平均电压降，当L一定时，加在两电极间的电压越高，分离所需时间越短，分离越完全。 4、电泳时间 电泳时间愈长，离子迁移距离愈大，一般情况下对分离是有利的。但是，随着离子迁移距离的增加，电泳带的宽度也会增加，对分离是不利的。分离性质相似的元素，单靠增加电泳时间收效不大。 9.3.3等速电泳 等速电泳最早称为离子电泳，是完全基于离子电荷的差异实现分离的，而且仅仅适合带同种电荷的离子的分离。 使用两种不同电解质溶液，一种是具有一定PH缓冲能力的前导电解质溶液，它所含有的前导离子L的迁移率比样品中所有待分离离子都快；另一种是终末电解质溶液，它所含有的终末离子T的迁移率比样品中所有待分离离子都慢。 以阳离子分离为例： L+ A+ B+ C+ T+ L+ A+ B+ C+ T+ 低浓度区 高浓度区 等速电泳中，可以根据任何一条区带中的电场强度来确定某种离子的存在，根据区带的宽度来确定某种离子的相对含量。 等速电泳既可以用于离子性物质的制备，也可以用于离子的定性和定量分析。 等速电泳分离效率高，速度快，选择性好，易于自动化，一些复杂样品甚至可以不经前处理直接进行分离分析。 电解质溶液的选择：1、应使待分离的有效离子淌度差异尽可能大；2、根据样品的性质和基体情况，还要考虑前导电解质PH值、与目标离子带相反电荷的缓冲配对离子、溶剂、其他添加剂等。 9.3.4等点聚焦电泳 等点聚焦是利用电场和PH梯度的共同作用来实现两性物质分离的电泳技术。 常用于蛋白质和氨基酸分离。 不同的蛋白质具有不同的等电点（pI）,当溶液中PH=pI时，蛋白质呈中性；当PH?pI时，蛋白质带正电荷；当PH?pI时，蛋白质带负电荷。 等电点：在某PH的溶液中，蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势或程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的PH称为该蛋白质的等电点。 如图，将蛋白质混合样品置于一个连续的外加PH梯度下，并施加外电场，假设从正极到负极PH值是增加的 PH增加 待聚焦的混合物 混合物被等点聚焦 在其起始PH位置带负电的蛋白质会向正极移动，在其迁移方向上PH逐渐降低，当达到与其pI相等的PH位置时，该蛋白质就变成中性分子，不再迁移。 等点聚焦电泳技术的关键是在分离装置中建立一个PH梯度场，通常是选择一种等电点在所要求的PH范围内的合成两性高分子电解质混合溶液，当施加电场后，各两性高分子电解质移动至各自的等电点上，形成一个稳定的PH梯度