杜鹃组培实验方案.doc

杜鹃组培实验方案 1 材料 1．1 供试材料 新天地大棚苗圃培育的盆栽杜鹃（Rhododendron）。 1．2 试剂器材 1.2.1 试剂 IAA、ZT、硝酸钾、?硝酸铵、硝酸钙、??硫酸铵、??氢氧化钠?、二水氯化钙、?七水硫酸镁?、磷酸二氢钾、??磷酸二氢钠?、?过硫酸铵、氯化钾、?过磷酸钙、??氢氧化钾、盐酸?、?乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）、乙二胺四乙酸铁钠（EDTA-FeNa）、?硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、?硼酸、碘化钾?、钼酸钠?、??氯化钴、硫酸铜、葡萄糖、酵母浸粉、甘露醇、?柠檬酸、D-果糖、??D-山梨醇、甘氨酸、?蔗糖、苯扎溴铵溶液、无水乙醇、乙醇?医用95%??次氯酸钠?、?甲醛?、高锰酸钾、??升汞? 1.2.2器材 天平、冰箱、pH试纸、水浴锅、微量移液器、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、微孔过滤灭菌器、紫外线杀菌灯、超净工作台、接种器械杀菌器、接种箱、解剖镜、培养架 2 试验设 计与 方法 2．1 外植体的获取与灭菌 选取生长正常无病害的植株，摘取当年新发嫩茎，在自来水下冲洗 30 m in ，边洗边用牙刷刷洗表面 ，在高浓度的洗衣粉液中浸泡 10 ~ 20 m in ，自来水下冲净 ；在超净工作台上 ，用 75％酒精消毒30 -60 s，0.1％升汞液消毒 l2 —15 m in ，无菌水漂洗 1 次；再用10％双氧水液浸泡 3 ～5 m in ，无菌水漂洗 5 次 ；最后用无菌滤纸吸干表面水分 ，用解剖刀、剪刀等分出茎尖、茎段(带 2 —4 芽苞 ) 接种到培养基上。2.2 基本培养基的筛选试验以 M S、改良 W PM 、1／ 2M S 3种培养基为基本培养基 ，不添加任何激素 ，以茎段为外植体进行预培养。 培养基中含琼脂 1．0％ ，蔗糖 3．0％，pH 5．4(以下培养基琼脂 、蔗糖含量、pH 均相同)。每个处理接种3个材料 ，试验重复 3 次。 每天观察 、记录外植体生长情况，连续观察 3 个月。2．3 培养材料筛选以杜鹃当年生茎尖、茎段为外植体，以 1／ 4 培养基为基本培养基， 附加 ZT 0．5 m g／ L 和 N A A 0．01m g／ L ，观察记录茎尖、茎段的存活率、萌发率 、萌发时间等。 每个处理接种3个材料 ，试验重复 3 次。2 ．4 外源激素的筛选以杜鹃茎段为外植体，以 1／ 4 培养基为基本培养基，利用ZT和NAA不同浓度配比设置一个二因素两水平正交实验，记录具体浓度配比，力求找出合适杜鹃茎段培养的激素种类及浓度。 每个处理接种3个材料，试验重复 3 次。 3 培养条件培养温度(25±1) ℃，光照时间 12 h／ d，光照强度40 ～60μm ol /(m ·s) 。