样品非靶向代谢组分析.pdf

代谢组学分析 （metabolomics ） 实验报告 项目名称： 委托单位： 项目编号： 检测人员： 核验人员： 技术服务部负责人： 报告时间： 1 / 18 目录 1. 代谢组学实验原理 3 2. 项目实验流程 4 3. 实验仪器和试剂 5 4. 实验方法 5 4.1 样品信息 5 4.2 样本预处理方法 5 4.3 色谱-质谱分析 6 4.4 数据处理 7 5. 实验结果 7 5.1 实验质量控制 7 5.2 各组样本的典型代谢谱图 9 5.3 数据分析 11 6. 差异代谢物KEGG 代谢通路分析 17 7. 实验结论 17 8. 参考文献 18 9. 附件总结 18 2 / 18 1. 代谢组学实验原理 代谢组学（metabolomics ）是在后基因组学时代兴起的一门跨领域学科，其 主要目标是定量的研究生命体对外界刺激 、病理生理变化 、以及本身基因突变而 [1] 产生的其体内代谢物水平的多元动态反应 。代谢组学诞生于上个世纪末 ，由英 国伦敦帝国大学 Jeremy Nicholson 教授创立 ，之后得到迅速发展并渗透到多项领 域 ，比如疾病诊断 、医药研制开发 、营养食品科学 、毒理学 、环境学 ，植物学等 与人类健康护理密切相关的领域。 从分析技术的角度来看 ，非靶向代谢组学是尽可能多地定性和相对定量生物 体系中的代谢物 ，最大程度反映总的代谢物信息 。针对生物样本中小分子代谢物 种类多、极性跨度大和浓度动态范围大的特点，色谱-质谱技术成为代谢组学研 究最重要的工具 。LC-MS是以高效液相色谱作为分离系统 ，高分辨率质谱为检测 系统的一种串联分析平台；与其他色谱-质谱联用技术相比，LC-MS更适用于分 析难挥发或热稳定性差的代谢物 。超高效液相色谱通过应用1.7 μm超细粒径填料 填充的色谱柱 ，比传统HPLC的分析速度至少提高1倍 ，灵敏度和分离度提高数倍 [2] ，目前 ，超高效液相色谱与四级杆-飞行时间（Q-TOF ）质谱联用技术已被广泛 用于代谢组学研究 。亲水相互作用色谱 （HILIC ）是专门针对强极性代谢物而开 发的色谱柱 ，因拥有和反相色谱（RPLC ）互补的选择性而得到广泛重视和应用。 [3] 研究表明 ，HILIC-ESI （±）-Q-TOF MS能提供中心碳循环代谢的最大信息量 。 基于超高效液相色谱-Q-TOF MS 的非靶向代谢组学分析流程一般包括：样 品预处理、代谢物提取 、LC-MS 全扫描检测、数据预处理、统计分析及差异物 结构鉴定 。本实验采用 HILIC UHPLC-Q-TOF MS 技术结合数据依赖采集方式对 样本进行全谱分析，同时获得一级质谱和二级质谱数据，随后采用 XCMS 对数 据进行峰提取和代谢物鉴定，简单工作流程见图 1[4] 。 3 / 18 图1 实验流程图 2. 项目实验流程 主要步骤包括 ：样品制备 、QC 制备 、样品LC-MS/MS 质谱分析 、数据分析和实 验报告等。 代谢组学技术路线 4 / 18 3. 实验仪器和试剂 Triple TOF 6600 质谱仪（AB SCIEX ） Agilent 1290 Infinity LC