牙鲆淋巴囊肿病毒纯化及不同来源病毒免疫特性比较.pdfVIP

第 30 卷第3 期 确业科学进展 Vo 1. 30 ,No. 3 200 9 年 6 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Jun. ,2009 牙鱼平淋巴囊肿病毒纯化及不同来源病毒免疫特性比较 程顺峰1.2 绳秀珍1 战文斌1 铸 (l中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，青岛 266003) (2青岛农业大学动物科技学院.266109) 摘要 比较了 3 种不同的牙绊淋巴囊肿病毒纯化方法，优化后的方法如下:剥离囊肿表面薄膜，收 集内容物，匀浆后再用超声波细胞破碎仪破碎，反复冻融，650X g、 1 800 Xg 差边离心，30% (W/W) 煎糖垫底超速离心(78500Xg) 浓缩病毒，最后蕉糖密皮梯度超速离心(78 500 X g) 纯化病毒。也钝 观察发现，出现在 47%--52%蕉糖密度区域的病毒带含有多黄、纯净和结构一致的病毒粒子。此外， 利用制备的兔抗血清对不同地区的病毒进行了免疫特性分析.Western blotting 检测显示来自威海、 青岛及秦皇岛 3 个地区的淋巴囊肿病毒反应结果是…致的，均有 3 条蛋白带发生反应，其分子最分别 为 125 、 66 和 55kDa. 起这离心 分离纯化 免疫特性比较 关键词 淋巴囊肿病毒 中圈分类号 S948;S943 文献识别码 A 文章编号 1000-7075(2009)03-0049-06 Purification and western blotting of three strains of Iymphocystis disease virus 1 2 1 铸 CHENG Shun-feng • SHENG Xiu-zhen ZHAN Wen-bin1 e Key Laboratory of Mariculture , Ministry of Education • Ocean University of China , Qingdao , 266003) e Qingdao Agricultural University. 266109) ABSTRACT The diseased ]apanese flounders Paralichthys olivaceus were obtained from a culture farm near Qingdao. The lymphocystis nodules were cut down and washed with TNE buffer C50mmo l!L Tris , 100mmol/L , 1mmol/L ED丁A. pH 7.4) , about 10 g of nodules were homogenized and suspended in 90 ml 丁NE buffer at 4 C. 丁he suspension was subjected to three rapid freeze/thaw cycles. Following ultrasonication , the virus…cell debris suspension was centrifuged at 650 X g for 20 min at