大鼠动脉粥样硬化COX2 mRNA表达及白黎芦醇干预的实验研究.docVIP

　　大鼠动脉粥样硬化COX2 mRNA表达及白黎芦醇干预的实验研究 作者：张丽 张涛 朴金花 张鹏霞 【摘要】 目的 观察白黎芦醇对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠主动脉粥样硬化段COX2 mRNA表达的影响。方法 雄性SD大鼠高脂饲料喂养，复制食饵性AS早期模型,用药组灌胃白藜芦醇。造模给药4 RNA的表达。结果 用药组降低AS早期主动脉硬化段COX2表达,阻止AS的进程。结论 白藜芦醇对大鼠AS具有保护作用,并能提高AS斑块稳定性。 【关键词】 白藜芦醇;动脉粥样硬化;环氧合酶2 mRNA 环氧合酶(cyclooxygenase,COX)又名前列腺素内过氧化物合成酶P(GHSs)，是一种膜结合蛋白，是前列腺素生物合成的限速酶,该酶有2种亚型,即COX1和COX2。近年来许多研究表明诱导型酶COX2与心血管疾病关系密切〔1〕。白黎芦醇具有广泛的抗动脉粥样硬化（AS）、抗肿瘤及类雌激素性作用，并逐渐成为预防和 治疗 AS的热点〔2〕。但其对AS早期模型主动脉硬化斑块中COX2表达的影响未见报道。本研究旨在为治疗AS的药物开发方面开辟新的思路。 　　 1 材料与方法 　　1.1 药物与试剂 白藜芦醇由本实验室从虎杖中提取(99%,HPLC),白藜芦醇标准品由Sigma公司提供。实验时用蒸馏水配成混悬液。Trizol和逆转录PCR试剂盒分别为上海生工生物公司和大连TaKaRa公司产品。血清总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)测定试剂盒为上海科欣生物技术研究所产品。 　　1.2 模型制备及给药方法 健康雄性SD大鼠30只,体重180～200 g,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。普通饲料喂养1 g·kg-1·d-1)连续灌胃4 RNA表达。 　　1.4 RTPCR检测COX2 mRNA表达 用Trizol提取主动脉硬化段总RNA,然后用紫外分光光度计测定其纯度并定量，1%琼脂糖凝胶电泳验证RNA完整性。按照逆转录试剂盒说明进行逆转录合成cDNA;以GAPDH为内对照,进行半定量逆转录聚合酶链反应。序列为：COX2:上游5′AAACTGTACTACGCCGAGAT3′，下游：5′TCCACCGATGACCTGATA3′，其扩增产物长度为580 bp。内参照GAPDH 5′TGCTGAGTATGTCGTGGAG3′(上游)，5′GTCTTCTGAGTGGCAGTGAT3′ (下游)，其扩增产物长度288 bp。各组反应条件为：94℃预变性3 min后，94℃变性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸30 s,共进行35次循环,最后再72℃延伸5 min,4℃冷却终止反应。以GAPDH为内参照同时进行PCR。聚合酶链反应产物用溴化乙啶的1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。用GDS8000凝胶扫描分析系统分别对COX2进行吸光度扫描， 计算 出COX2 基因表达量与GAPDH基因表达量的比值。 　　1.5 统计学处理 计量资料采用x±s表示，多组数据间比较采用F检验和q检验，两组间数据比较采用t检验。 　　 2 结果 　　2.1 对COX2 mRNA表达的影响 RTPCR结果显示，模型组大鼠主动脉硬化段组织的COX2 mRNA表达(1.29±0.36)较正常组(0.35±0.04)增加，用药组(0.95±0.27)较模型组明显降低，差异均具有统计学意义(均P＜0.01)。见图1。 　　M：Marker；1：对照组；2：模型组；3：用药组 　　图1 各组大鼠主动脉壁粥样硬化段COX2 mRNA表达（略） 　　2.2 高脂饮食对大鼠血脂的影响 高脂饮食喂饲,对照组与模型组大鼠血清TC、TG、HDLC分别为(1.85±0.32) vs (14.83±3.91)、(0.63±0.19) vs (0.91±0.15)、(1.57±0.14) vs (0.58±0.07) mmol/L。模型组较对照组大鼠血清TC、TG显著升高，HDL显著降低，差异均具有统计学意义(均P＜0.05)。 　　 3 讨论 　　近年来许多研究表明COX2与动脉粥样硬化性心、脑血管疾病关系密切〔3〕。有学者把AS本身也看作是一种炎症反应过程，认为炎症释放的细胞因子可诱导和表达COX2，加速AS进程并导致AS斑块的增大和脱落〔4〕。在检测人类AS斑块时,同样发现有大量的COX2 mRNA表达,并且与基质金属蛋白酶、NO合成酶含量呈明显的正相关性,提示在AS时,以上因素在粥样斑块形成方面有协同作用。使用选择性COX2抑制剂可减低TXA2的浓度,抑制血管痉挛,保护心肌功能,从而减轻I/R对心肌的损伤〔5〕。在肺炎衣原体所致AS的模型中发现,其斑块中出现了明显的炎症改变