与CYPOR共表达CYP2D6^＊1和CYP2D6^＊10及其代谢活性比较.pdfVIP

药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2011，46(2)：207-212 ·207 · 与 CYPOR共表达 CYP2D6*I和 CYP2D6*10及其代谢活性 比较 钱鸣蓉 一，陈 静 1刘 瑶 ，余露山 ，陈枢青 ，曾 苏 (1．浙江大学药学院，浙江 杭州 310058；2．浙江省农业科学院农产品质量标准研究所，浙江 杭州 310021) 摘要：细胞色素P4502D6(cytochromeP4502D6，CYP2D6)是一种重要的氧化代谢酶，呈基因多态性，对药 物的代谢呈现明显的个体差异和种族差异，CYP2D6*10在中国人群中的发生率高达 51．3％。采用杆状病毒昆虫 表达系统，采用与细胞色素氧化还原酶 (cytochromeoxidoreductase，CYPOR)共表达的方式获得具有代谢活 性的CYP2D6*1／CYP2D6*10，并初步研究其催化右美沙芬的代谢活性差异。构建重组质粒 pFastBac—CYP2D61， pFastBac．CYP2D6*10和 pFastBac—CYPOR，并分别转化 DH10Bac菌株构建重组 Bacmid．CYPOR，Bacmid— CYP2D6*1和 Bacmid．CYP2D6*10，转染 Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒用于病毒扩增和感染 Sf9昆虫细胞。 通过测定混悬蛋白催化右美沙芬的速率来优化重组 CYPOR和 CYP2D6病毒感染 Sf9昆虫细胞的感染复数 (multiplicityofinfection，MOI)值和其比例，获得活力较高的重组CYP2D6*1和 CYP2D6*10。重组CYP2D61 催化右美沙芬的 为 (26．67~2．71)gmolL· =3)，Zm 为 (666．7士56．78)pmol’nmol～(CYP2D6)’min ：3)，清 除率为25．0；CYP2D610催化右美沙芬的 ，m为 (111．36~10．89)~tmolL· =3)， 为 (222．2a：20．12)pmol。nmol (CYP2D6)．min =3)，清除率为 2．0。利用杆状病毒 昆虫细胞系统表达的重组CYP2D6*l和 CYP2D610代谢药 物具有活性差异，可用于体外研究其催化某些药物的代谢差异，这有助于理解药物代谢的个体差异、预测药物之 间的相互作用。 关键词：昆虫表达系统：细胞色素P4502D61；细胞色素 P4502D610；细胞色素氧化还原酶；代谢差异 中图分类号：R969 文献标识码：A 文章编号：0513．4870(2011)02—0207—06 CYP2D6 1．CYP2D6 10CO-expressedwithCYPOR inBac—to—Bac expressionsystem andactivitydetermination QIANMing—rong，，CHENJing，LIUYao，YULu—shan，CHENShu—qing，ZENGSu (．CollegeofPharmaceuticalSciences，ZhejiangUniversity,Hangzhou310058,China； 2．InstituteofQualiytStandardsforAgriculturalProducts，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Hangzhou310021，China) Abstract：CYP2D6 iSan importantdrug．metabolizing enzyme． Thepolymorphism ofCYP2D6 lcadsto metabolism differenceandthedifferentreactionsofdurgsintheindividualsanddifferentracesarenormal phenomenoninclinicalmedication． CYP2D6 10iSanimportantsubtypeinAsianpeopleand51_3％ Chinese areclassifiedwiththissubtype．