液相基本术语及操作[公开课].docVIP

液相色谱检测 1 仪器的基本常识及术语 1.1 仪器结构：液相色谱仪主要包括泵、进样器、色谱柱、检测器； 1.2 仪器分类：液相色谱仪属于精密仪器中的色谱仪器； 按照分为离机制，吸附、分配、离子交换、亲和色谱，体积排阻色谱； 按照流动相与固定相的极性，分为正相色谱法和反相色谱法； 1.2.2 高效液相色谱法的应用范围：高效液相色谱法适用于高沸点不易挥发、受热不稳定易分解、分子量大的，不同极性的有机化合物，生物活性物质和多种天然产物，合成的和天然的高分子化合物等。 1.3 仪器检定：液相色谱仪检定周期为1年，在两次检定间期内进行一次期间核查，也可以根据情况增加核查次数； 1.4 维护保养：对于液相维护方式主要是周维护和日维护，其中周维护包括联机系统及中工作站软件维护、数据库整理备份、检测器自检、维护单向阀、溶剂砂芯滤头、进样器、电机泵检查维护、溶剂瓶清洗等；日维护包括环境温度、环境湿度、色谱柱温度、压力流速、进样口是否洁净、进液处的砂芯过滤头是否洁净、流动相交换时是否有沉淀； 1.5色谱法的常用基本术语 基线：在色谱操作条件下,没有被测组分通过鉴定器时,记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线. 死时间,保留时间及校正保留时间:从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间,以td表示.从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间,以tr表示.保留时间与死时间之差称校正保留时间.以Vd表示. 死体积,保留体积与校正保留体积:死时间与载气平均流速的乘积称为死体积,以Vd表示,载气平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留时间与载气平均流速的乘积称保留体积,以Vr表示,Vr=trxFc 峰面积：流出曲线(色谱峰)与基线构成之面积称峰面积,用A表示. 拖尾因子：是反映峰对称性的指标，计算公式：拖尾因子 T＝W0.05h/2d1（其中W0.05h为5%峰高处的峰宽，d1为峰顶点至峰前沿之间的距离）。 峰高与半峰宽:由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交点间的高度称为峰高,一般以h表示.色谱峰高一半处的宽为半峰宽,一般以 x1/2表示； 1.7 色谱检测的特性 （1）灵敏度高； （2）线性范围宽； （3）分离度与柱效、选择因子、容量因子、分析时间的关系： （4）分离度与柱效的平方根成正比，选择因子一定时，增加柱效； （5）分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化：一般通过改变固定相和流动相的性质和组成或降低柱温，可增大选择因子； （6）增大选择因子的最有效方法是选择合适的固定液。对于液相色谱，改变流动相的组成，可以有效控制k； 2 仪器的操作规程 2.1 日立液相设备 L-2000/2400操作规程 2.1.1 使用环境 环境温度：4℃—55℃； 相对湿度：小于95%RH。 2.1.2 使用前准备 检查所用溶液(如流动相，乙腈等)是否足够。 检查线路是否连接正常。 2.1.3 设备操作方法 具体操作如下： (1)依次开启泵开关，检测器开关，自动进样器开关， 柱温箱开关； (2)打开软件，点击“i”按钮，出现联机界面，点击 “Iinitialize” [ini??.laiz]按钮，当文本框出现文字时，表示联机成功； (3)检查所用方法是否符合要求。如不符合，进行设置； (4)开泵。 检测 具体操作如下： (1)建立所需样品盒； (2)点击检测按钮，选择刚建立的样品盒； (3)首先进行走基线； (4)当基线走平时，点击系列样品检测按钮，进行标样， 样品检测； (5)当标样检测结果出来时，打开结果窗口，选择所需 标样结果，点击“Recalculate[ri:k?lkjuleit] 进行重新计算，然后点击“Calibration” [ k?librei??n]进行定标； (6)当样品结果出来时，打开结果窗口，选择所需样品 结果，点击“Recalculate” [ri:k?lkjuleit]进行重新计算，然后点击“ModifyReport” [m?difai,?] [rip?:t,] ,出现结果报告，即可查看样品具体结果。 2.1.4 更换流动相 具体操作如下： (1)当流动相快不够时或异常时，及时更换流动相； (2)先把泵关闭，将流动相入口放入新流动相中； (3)将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭 排气功能； (4)排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵； (5)走基线，当基线走平时，开始做标样，做样。 2.1.5 关机 具体操作如下： (1)先把泵关闭，将流动相入口更换为超纯水； (2)将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭 排气功能； (3)排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵； (4)用超纯水冲洗管路大约20分钟； (5)把泵关闭