具ACC脱氨酶活性大豆根瘤内生菌的筛选、抗性及促生作用.pdfVIP

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2016, 56(6): 1009-1021 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Paper 研究报告 具ACC脱氨酶活性大豆根瘤内生菌的筛选、抗性及促生作用 1 * 1 2 1 1 1 1 1 赵龙飞 ，徐亚军，常佳丽，李敏，张艳玲，党永杰，王梦思，程亚稳， 张斌月1 1 河南省高校植物与微生物互作重点实验室, 商丘师范学院生命科学学院，河南 商丘 476000 2 清华大学环境学院，水环境保护研究所，北京 100084 摘要： 【目的】从大豆根瘤中筛选具ACC (1-氨基环丙烷-1-羧基)脱氨酶活性的内生细菌，对活性菌株的 抗盐碱性、系统分类地位以及代表菌株的促生长作用进行研究，为发掘和应用抗逆、促生优良菌种资源 提供理论基础。【方法】以ACC作为唯一氮源测定菌株产ACC 脱氨酶特性，采用标准曲线法测定α-丁酮 酸含量，比色法定量测定ACC脱氨酶活力，固体平板筛选法对活性菌株进行抗性分析，通过菌体形态及 生理生化特性测定、16S rRNA基因序列同源性分析鉴定菌株分类地位，采用盆栽试验验证代表菌株的促 生作用。【结果】从河南省13个市(地区)36个点采集的大豆根瘤中筛选出8株ACC脱氨酶内生细菌，其中 菌株DD132 的酶活性最高(15.712 U/mg) 。筛选菌株可耐受4%–6% NaCl, 其中菌株DD165 、DD132可耐受 9% NaCl盐浓度。在pH 11时5株(DD14、DD132 、DD67 、DD141 、DD131)生长良好，说明这些菌株有较 强耐碱性。8株产ACC脱氨酶菌株分属于4属，即芽孢杆菌属(Bacillus) 、肠杆菌属(Enterobacter) 、寡养单 胞菌属(Stenotrophomonas)和泛菌属(Pantoea) 。接种试验表明内生菌DD132对小麦幼苗生长具有明显促生 长作用。【结论】大豆根瘤内具ACC脱氨酶高活性菌株有较强耐盐碱性，其中菌株DD132对小麦幼苗生 长有明显促生长作用。为发掘和应用抗逆、促生的优良菌种资源提供理论基础。 关键词：ACC脱氨酶, 根瘤内生菌, 抗性, 系统发育, 促生作用 工业化肥大量施用和盐碱化面积不断扩增， 决上述问题提供了新的思路。一些根际微生物代 造成我国农田大面积土壤板结、环境污染以及投 谢产物如ACC脱氨酶，可增强宿主植物吸收养 资成本增大等系列问题，严重影响土壤微环境生 分、提高抗逆性和促进植物生长，还兼有抗病原 [1] 态平衡和农作物健康生长 。植物根际蕴藏丰富 微生物效应及联合修复功能，达到农业增产、生 [ 2 ] 的微生物资源，对这些资源进行开发和利用为解 物防治和环境治理效果 。因此，筛选和研究 基金项目：国家自然科学基金 (U1204301) ；河南省高等学校青年骨干教师项目 (2012GGJS166) *通信作者。Tel ：+86-370-3115317 ；Fax ：+86-370-2595979 ；E-mail ：hnzhaolongfei@163.com 收稿日期：2015-09-26 ；修回日期：2015-12-06 ；网络出版日期：2015-12-11 101