利用原位二步灌流法分离鸡肝细胞.pdf

　　　 　《黑龙江畜牧兽医 》2007年第 1期 15 利用原位二步灌流法分离鸡肝细胞 李文清1, 2 ,刘 　丽1 ,韦建福1 ( 1. 华南农业大学 动物科学学院 ,广东 广州 5 10642; 2. 河南农业大学 生命科学学院 ,河南 郑州 450002) 中图分类号 : S83 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1004 - 7034 (2007) 0 1 - 00 15 - 02 关键词 :灌流 ; 鸡 ; 肝细胞 摘 　要 :试验选用 15 ～18 日龄的粤黄鸡苗 ,采用胶原酶原位二步灌流的方法分离肝细胞 。对小鸡破 坏大脑处死后 ,打开腹腔 ,先用 PB S液对小鸡进行门静脉快速灌流 , 当肝脏呈现苍白略带黄色时改用 Ⅳ型胶原酶溶液继续灌流 ,直至肝包膜与肝组织出现裂隙 , 即可分离出肝细胞 。结果表明:用原位二 步灌流法可得到大量活性高且分离较纯的鸡肝细胞 。 　　上皮细胞培养是研究细胞结构与功能的主要材 1. 1　试验动物 料 ,而肝细胞培养是上皮细胞培养试验的典型代表 , 15 ～18 日龄健康粤黄鸡苗 , 由华南农业大学种 并且肝脏是动物机体代谢的重要器官 ,因此研究肝细 鸡场提供 。 胞的培养方法有重要意义 。有人做过对小鼠进行原 1. 2　原位二步灌流法分离鸡肝细胞 位二步灌流来获取肝细胞 [ 1 ] ,但是用原位二步灌流 通过破坏大脑来处死试验用小鸡 ,按体重腹腔注 法来分离培养鸡肝细胞却从未见有报道 。这是因为 射肝素钠 200 U / kg。将小鸡仰卧于手术台上 ,用注 哺乳动物肝细胞培养已建立许多成功的方法 [ 2 ] ,但 射器针头固定小鸡双翅和双脚 。用手术剪和手术镊 对禽类肝细胞的培养人们研究较少 。试验采用胶原 打开腹腔 ,将内脏移向躯体左侧 ,暴露门静脉和肝下 酶原位二步灌流的方法获得了大量活性高且分离较 腔静脉 ,各置一线结扎 。用 60 mL 注射器吸取预热 纯的鸡肝细胞 ,为研究禽类的肝细胞功能又提供了一 37 ℃的 PB S液 ,选用小号注射器针头固定于门静脉 , 个很好的分离方法 。 对小鸡进行门静脉快速灌流 ,流速为 20 ～25 mL /m in 1　材料与方法 ( ) 注意速度不要太快 ,否则会使肝脏局部胀裂 。当 肝脏饱胀时剪断肝下腔静脉 ,进行开放式灌注 , 以除 收稿 日期 : 2006 - 02 - 28;修回日期 : 2006 - 05 - 02 去血液中的红细胞 ,直至肝脏苍白。改用预热 37 ℃、 ( ) 基金项 目: