专题5课题3血红蛋白的提取和分离a要点.ppt

1、相关基础知识 ②实例：葡聚糖、琼脂糖 * * 基 础 知 识 (一）蛋 白 质 1、相关基础知识 组成元素 相对分子质量 基本组成单位 氨基酸通式 氨基酸连接方式 肽键 分子结构 蛋白质结构的多样性 生理功能 含量 蛋 白 质 基 础 知 识 (一）蛋 白 质 2、 蛋白质分离和提取的原理 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质 基 础 知 识 ①性质：一些微小多孔的球体，内含许多 贯穿的通道 (一）蛋 白 质 （二）凝 胶 色 谱 法 （分配色谱法） 1、概念：根据被分离物质相对分子质量的大 小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用来进行分离的方法。 2、凝胶 基 础 知 识 （二）凝 胶 色 谱 法 3、凝胶色谱法的原理—分子筛效应 当不同的蛋白质通过凝胶时，（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ）而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 相对分子质量较小 较长 较慢 相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 基 础 知 识 (一）蛋 白 质 （二）凝 胶 色 谱 法 （三）缓 冲 溶 液 1、概念 在一定的范围内，能够抵抗外界的强酸、强碱或稀释的影响，不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 基 础 知 识 （三）缓 冲 溶 液 2、作用 维持PH基本不变 3、缓冲溶液的配制 通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液 思考：说出人体血液中缓冲溶液。 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性） 基 础 知 识 (一）蛋 白 质 （二）凝 胶 色 谱 法 （三）缓 冲 溶 液 （四）电 泳 1、概念 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程 基 础 知 识 （四）电 泳 2、原理 ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离 基 础 知 识 （四）电 泳 3、类型 琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳 基 础 知 识 （四）电 泳 4、实例 ①应用 十二烷基磺酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 ②聚丙稀酰胺凝胶 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素 ③原理 ④ SDS作用 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入SDS 基 础 知 识 （四）电 泳 4、实例 基 础 知 识 （四）电 泳 ⑤ SDS作用机理 SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种电荷间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 如何测定蛋白质的分子量？ 使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量时，可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳，根据已知分子量的标准蛋白的电泳区带位置，用电泳迁移率和分子量的对数作标准曲线，可以测定未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、次高分子量及低分子量的标准蛋白试剂出售.