第二节植物细胞工程及其应用.ppt

第二章 细胞工程 第二章 细胞工程 【知识目标】 ①了解制备植物细胞及微生物细胞的原生质体并进行细胞融合的基本方法。②学习进行动植物细胞及组织的培养方法。③认识单倍体植物的诱发及人工种子制备的基本要领。探讨植物脱除病毒的途径和检测手段。④掌握利用动物体细胞克隆哺乳动物的基本做法及其重要意义。⑤领会干细胞芯康脑砗凸饷髑熬啊 第三章 细胞工程 【技能目标】 ①学会描述植物组织培养、原生质体融合、动物细胞组织培养及细胞融合的基本过程。 ②掌握植物组织培养及快速繁殖的方法。 第一节 细胞工程概述 一、细胞工程的基本概念 细胞工程就是在细胞水平研究、开发和利用各类细胞的工程。 细胞工程是一种细胞水平上的遗传工程 第一节 细胞工程概述 二、细胞工程基础知识 细胞是细胞工程操作的主要对象。生物界有两大类细胞：原核细胞与真核细胞。原核细胞如：细菌、放线菌等。真核细胞如：酵母、动植物等。原核细胞生长迅速，无蛋白质结合的DNA易于人们进行遗传操作，是细胞改造的良好材料。 第一节 细胞工程概述 三、细胞工程基本技术 （一）无菌操作技术 实验操作应在无菌室内进行 无菌室要求 注意周围环境的卫生整洁 超净工作台是最基本的实验设备 对生物材料进行彻底的消毒和除菌是实验成功的前提 第一节 细胞工程概述 三、细胞工程基本技术 （二）细胞培养技术 细胞培养是指动物、植物和微生物细胞在体外无菌条件下的保存和生长 细胞培养步骤为：取材和除菌；配制细胞培养基，并对培养基进行灭菌或除菌；培养室培养 第一节 细胞工程概述 三、细胞工程基本技术 （三）?细胞融合技术 1.制备原生质体 2.诱导细胞融合 3.筛选杂合细胞 第二节 植物细胞工程及其应用 一、植物组织培养 （一）预备阶段 1.选择合适的外植体 ①大小要适宜。②同一植物不同部位的外植体，其细胞的分化能力、分化条件及分化类型有相当大的差别。③植物胚与幼龄组织器官比会化组织、器官更容易去分化，产生大量的愈伤组织。④不同物种相同部位的外植体其细胞分化能力可能大不一样。 第二节 植物细胞工程及其应用 一、植物组织培养 2.外植体的消毒灭菌 外植体→自来水多次漂洗→消毒剂处理→无菌水反复冲洗→无菌滤纸吸干。 第二节 植物细胞工程及其应用 一、植物组织培养 3. 配制适宜的培养基? 组织培养基通常都包括三大类组分：①含量丰富的基本成分如蔗糖或葡萄糖高达每升30克，以及氮、磷、钾、镁等；②微量的无机物，如：铁、锰、硼酸等；③微量有机物，如激动素、吲哚乙酸、肌醇等。各培养基中，吲哚乙酸和激动素的变动幅度很大，这主要因培养目的而异。 第二节 植物细胞工程及其应用 一、植物组织培养 （二）诱导去分化阶段 器官切段去分化，培养基中应添加较高浓度的生长素类激素 诱导外植体去分化可以采用固体培养基，在培养室中多层培养 外植体表面除菌后，切成小片（段）插入或贴放培养基表面即可 通常把它们置于人工照明条件下培养，以期得到绿色愈伤组织。 第二节 植物细胞工程及其应用 一、植物组织培养 （三）继代增殖阶段 愈伤组织长出后经过4~6周后 （四）生根成芽阶段 胚状体 光照是本阶段的必备外因 （五）移栽成活阶段 第二节 植物细胞工程及其应用 二、植物细胞培养和次生代谢物的生产 （一）悬浮细胞培养系统 第二节 植物细胞工程及其应用 二、植物细胞培养和次生代谢物的生产 （二）固定化细胞培养系统 1.平床培养系统 第二节 植物细胞工程及其应用 二、植物细胞培养和次生代谢物的生产 （二）固定化细胞培养系统 2.立柱培养系统 第二节 植物细胞工程及其应用 二、植物细胞培养和次生代谢物的生产 （二）固定化细胞培养系统 2.立柱培养系统 ① 要选用高产细胞株系。② 在营养液中加入目的产物的直接或近直接前体物质，往往对增产目的产物有特效。③ 对各类细胞的培养都应反复摸索碳源、氮源和生长调节物质的配比，找出最佳方案。④ 适量光照及通气在多数情况下有利于产物的生成。 第二节 植物细胞工程及其应用 二、植物细胞培养和次生代谢物的生产 （二）固定化细胞培养系统 以下简要介绍褐藻酸钙固定植物细胞的技术路线： 第二节 植物细胞工程及其应用 三、植物细胞原生质体制备与融合 （一）原生质体的制备 1.取材与除菌 2.酶解 3.分离 4.洗涤 5.鉴定 第二节 植物细胞工程及其应用 三、植物细胞原生质体制制备与融合 （二）原生质体的融合 1.化学法诱导融合 聚乙二醇（PEG）结合高钙高PH诱导融合法 2.物理法诱导融合 平行电极法 第二节 植物细胞工程及其应用 三、植物细胞原生质体制制备与融合 （二）原生质体的融合 融合处理后再生的细胞株将可能的类型：①完全的杂合植株②核质异源的植株③融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或DNA片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未