应用人类全基因组芯片检测多药耐药白血病细胞株HL.docVIP

　　应用人类全基因组芯片检测多药耐药白血病细胞株HL 作者：董宝侠，陈协群，王哲，梁蓉，白庆咸，黄高昇，张伟平，高广勋，韩冬梅 【摘要】 本 研究 利用基因芯片技术检测白血病多药耐药细胞株HL-60／VCR及其亲本细胞株差异基因表达谱，探讨急性白血病多药耐药机制。本试验提取白血病细胞株HL-60及其多药耐药细胞株HL-60/VCR的 mRNA，在反转录及体外转录过程中分别用生物素进行标记，与Affymetrix公司人类全基因组芯片U133A杂交，用Affymetrix专用芯片扫描仪G2500A GeneArray Scanner及Microarray Suite 、Micro DBTM GeneChip LIMS、GeneChip DMT 分析 软件系统处理杂交信号获取结果。结果表明：白血病细胞株HL-60及其耐药株HL-60/VCR差异显示基因5 507条，其中耐药细胞株中上调表达基因3 100条，下调表达基因2 407条；差异极显著性基因 1 040条，表达上调435条，下调605条，涉及与细胞生长活动及信号转导相关的基因。结论：多基因参与白血病细胞株的多药耐药机制，基因芯片技术是并行分析多个基因、探讨白血病多药耐药机制的有效 方法 。 【关键词】 基因芯片 　　Difference of Gene Expression Profiles betan Genome Genechip 　　Abstract This study ed to detect the gene expression profile changes betan acute leukemia cell line HL-60 and VCR-resistance HL-60，and to investigate the underlying mechanisms of MDR by using genechip technology. In experiments，mRNA these tan genome U133A developed by Affymetrix. It age an acute leukemia cell line HL-60 and VCR-resistant HL-60. pared ong the genes arkable differential expression betany different kinds of genes are involved in the mechanism of MDR and there is an intricate molecular ia cells to the chemotherapeutic agents. Genechip is an efficient tool for parallel gene expression analysis. 　　Key ultidrug resistance; leukemia; HL-60; HL-60/VCR 　　基因芯片技术是近年来 计算 机技术与生物学技术交叉的产物。它通过使用微加工、微 电子 技术及其他相关技术，在固体表面合成大量探针，利用生物大分子DNA的结构及其碱基配对原则，实现对核酸分子中基因片段的准确、快速、大信息量的检测。化疗是 治疗 急性白血病的主要手段，而白血病细胞对化疗药物的原发或继发耐药是导致化疗失败的根本原因。白血病的多药耐药现象是导致白血病复发及化疗失败的主要原因。 目前 发现的肿瘤多药耐药机制主要涉及P-gp﹑MRP﹑LRP﹑BCRP、GSH/GST﹑PKC、TopoⅡ、DNA修复、多种凋亡相关基因和肿瘤细胞生活的内外环境（如pH、缺氧、温度）变化。但白血病MDR的机制并非单一，它错综复杂，以 网络 的形式相互作用并相互制约，且在临床上根据现有的MDR机制采取的逆转耐药措施并不十分有效。基因芯片为我们提供了进行观察、分析不同种类基因与白血病耐药相互关系的平台，为进一步探讨肿瘤耐药机制、临床寻求有效逆转耐药方法创造了条件。我们选用Affymetrix公司人类全基因组芯片U133A［8］，对急性白血病耐VCR细胞株与其亲本细胞株差异表达基因进行筛选和分析。 　　材料和方法 　　药品 　　长春新碱（VCR）购自美国Sigma公司，柔红霉素、阿糖胞苷购自 Pharmacia-Upjohn公司，拓朴替康为贵州汉方制药厂产品，米托蒽醌为四川升和制药有限公司产品，羟基喜树碱为黄石飞云制药厂产品，足叶乙甙为连云港制药厂产品。以上药物用无菌生理盐水稀释、过滤并分装，-20℃保存备用。PgP单克隆抗体为Immunotech公司产品，TrizoL为Gibco公司产品，基因芯片HU-133A购自Affymetrix公司，