分子生物学实验：7 实验七 基因的图位克隆技术.pptVIP

图位克隆：遗传学的经典策略 孔忠新 2012.05.21 图位克隆的定义： 图位克隆(Map-based cloning) 又称定位克隆(positional cloning)，用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的，无需预先知道基因的DNA 顺序，无需预先知道其表达产物的有关信息。 用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对稳定的基因座，再利用分子标记技术对目的基因进行精确定位的基础上，用与目的基因紧密连锁的分子标记筛选DNA文库，从而构建目的基因区域的物理图谱，再利用此物理图谱通过染色体步移逐步逼近目的基因或通过染色体登陆的方法，最终克隆目的基因并通过遗传转化实验可以研究目的基因的功能。 图位克隆的原理： 1. 建立目的基因的遗传分离群体 2. 找到与目的基因紧密连锁的分子标记 3. 用遗传图或物理作图将目的基因定位在染色体特定位置 4. 构建含有大插入片段的基因组文库 5. 以与目的基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库 6. 用阳性克隆构建目的基因区域的重叠群 7. 通过染色体步移或登陆，获得含有目标基因的大片段克隆 8. 通过亚克隆获得目标的小片段克隆 9. 测序获得候选基因碱基序列 10. 通过遗传转化和功能互补验证，最终确定目标基因的功能。 图位克隆的一般流程： 标记1 基因 标记2 标记1 基因 标记2 2 3 4 5 6 BAC重叠群 BAC