（Molecular Biology）分子生物学 4.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * DNA热变性从开始到完全解链是在一个相当窄的温度范围内完成的。通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为DNA的解链温度，用Tm表示。 Tm是DNA样品中(G+C)含量的函数，对于长DNA分子，其取值范围是80-100?C。 3)影响Tm值的因素： What parameters affect theTm? a) DNA片段长度及其均一性 % dsDNA b) (G+C)含量。DNA每增加1%的(G+C)含量，Tm值增加大约0.4 ?C。 Tm=69.3+0.41x(G +C)% (G+C)%=2.44x (Tm-69.3) c)介质的离子强度。介质的离子强度低时，Tm值也低，熔解温度范围也宽。 4) 环状DNA的变性： 如果两条链都是闭合环状的, 变性可以打破双螺旋结构，但两条单链相互缠绕在一起，不能分开。 如果其中一条或两条链上有切刻，两条链在热变性时将分开。 4. DNA复性 在一定条件下，变性的DNA的互补碱基对间氢键重新形成，恢复原来的双链状态，称为复性。热变性DNA经缓慢冷却后即可复性，也称为退火。 快速降温： 仅在局部区域发生碱基配对，重新形成双链。光吸收值下降很小。如dsDNA加热变性后将其迅速冷却至4℃以