实验五、双向琼脂免疫扩散.PPTVIP

实验五、双向琼脂免疫扩散 实验目的 学习双向琼脂免疫实验原理 掌握双向琼脂免疫实验操作方法 实验原理 免疫扩散试验是抗原和抗体在琼脂内各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线。 双向免疫扩散可根据沉淀线的位置、数量、形状以及对比关系，对抗原或抗体进行定性分析，常用于抗原和抗体的纯度鉴定以及抗体效价测定。 双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅花孔型 双向免疫琼脂扩散孔型 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 三孔型 双孔型 梅花孔型 ○ ○ ○ ○ 三 材料与器材 载玻片、移液管、三角瓶、针头（牙签） 微量移液器(20ul)、恒温箱、打孔器、保湿盒、酒精灯、1.5％琼脂、大鼠血清、兔抗大鼠抗血清、1.5ml离心管 四 操作步骤 用移液管吸取热溶解的1.5％琼脂4ml，平铺于载玻片上。 待琼脂自然冷却凝固后，按梅花孔型打孔，孔径3mm,中心孔与边缘孔距离10mm。用针挑去孔内琼脂。 1.制板： 2.打孔： 用微量加样器将大鼠血清抗原15ul加入中间孔； 将兔抗鼠IgG抗体用生理盐水稀释成 不同稀释度，加入周围1－5各孔中，每孔15ul 。第6孔为空白（生理盐水15ul） 3.加样：