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才思教育考研考博全心全意 中国农业大学食品学院生物化学知识点总结 第十一章DNA的复制 DNA生物合成概述: 核酸的生物合成是模板指导下进行的，模板有DNA和RNA.因此,DNA合成分为DNA为模板的DNA复制和RNA 为模板的逆转录 DNA合成主要原料为四种脱氧核苷三磷酸 酶系和辅助因子的参与 本章主要讲解DNA复制 以原来DNA分子为模板合成出具有相同分子的过程,自我复制 一.DNA的半保留复制 1958年,MeselsonStahl氯化铯梯度离心实验 多种真核和原核生物做了类似实验,证明DNA的复制为半保留复制，但由于实验研究中的DNA均为提取的片 断,反映复制前和复制后的状态 1963年，Cairns用放射自显影的方法观察到完整的正在复制的大肠杆菌染色体DNA DNA的半保留复制 98 以双链DNA分子的每一条链为模板，按照碱基配对的原则，合成出两个与原DNA分子碱基顺序完全一样的新 DNA分子，其中每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的，这种复制方式为半保留复制 二. DNA复制的起点和方式 复制子:基因组能独立进行复制的单位,包含控制复制的起点和复制的终 . 单一复制子和多复制子 复制的起 :特殊的碱基序列能与控制复制开始的蛋白质或酶特异识别,结合,复制开始 复制叉:复制开始,两条链解开,形成的叉形结构. 复制终 :原核生物环状DNA分子具有特殊的碱基序列,终止复制.真核生物不同复制叉相遇,复制终止. 复制方向和复制方式 三. DNA的半不连续复制 随着复制叉的延伸,DNA的两条母链分别合成与其互补的子链,目前分离到的催化DNA形成的聚合酶的合成方 向都是5 →3 ,DNA在复制时如何同时作为模板合成其互补链? 半不连续复制当DNA复制时，一条链是连续的，另一条链是不连续的，因此称半不连续复制；前导链；滞 后链 四.DNA复制有关的酶和蛋白质 1. DNA聚合酶 DNA的复制、校对和修复 1956年Kornberg从大肠杆菌中发现DNA聚合酶,其他生物找到该种类型的酶 在有模板和Mg2+存在下催化四种脱氧核糖核苷三磷酸合成DNA 更多资料下载： 才思教育考研考博全心全意 DNA聚合酶只能催化脱氧核糖核苷酸加到已有核酸链的游离3-羟基上,合成需要引物链存在 合成需要模板指导,合成的DNA链只与模板有关,与底物比例无关 催化合成方向为5 →3 大肠杆菌DNA聚合酶 DNA聚合酶I 1956年,Kornberg大肠杆菌分离得到,FW103kD,单链蛋白球型分子,直径约为DNA的三倍,400个/细胞 三个活性中心:DNA聚合酶活力,1000bp/min;3 →5 核酸外切酶活力,校对; 5 →3 核酸外切酶活力,修复、引物链去除 蛋白酶将DNA聚合酶作有限水解,得到两个片段,大片段具有聚合酶和3 →5 核酸外切酶活力,小片段具有 5 →3 核酸外切酶活力 合成速度太慢,复制叉移动速度的1/20;持续合成能力差,合成50bp与模板分离;遗传分析,缺陷型DNA复制基 本正常 不是主要的复制酶,修复酶 DNA聚合酶II 多亚基酶,聚合活力较DNA聚合酶I稍高,引物为带缺口的双链DNA,无5 →3 外切酶活性，100个/细胞 功能：可能在DNA的修复中起重要作用 DNA聚合酶III 多亚基组成,催化聚合速度高,10-20个/细胞,被认为大肠杆菌真正的复制酶 现认为DNA聚合酶全酶由10种亚基组成的复杂的二聚体 DNA聚合酶III的结构模式图 DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ 99 1999年发现,DNA受到损伤时,诱导产生这两种酶,对损伤部位进行复制,但修复错误率高 真核生物DNA聚合酶 哺乳动物发现五种:α,β,γ,δ,ε及各自作用 2.拓扑异构酶 功能：DNA超螺旋松弛,消除解链产生的扭曲张力 TopI:单链蛋白质,广泛存在于原核和真核生物转录区,在转录过程中发挥作用切开超螺旋DNA的两条链中的 一条，切口末端反超螺旋转动，闭合 TopII:DNA旋转酶，多链蛋白质，广泛存在于原核和真核生物染色质骨架蛋白和核基质部位，与复制有关, 同时切开两条链，DNA松弛，切口封接 3.解螺旋酶 将DNA双链碱基氢键打开,成两条单链,每解开一对碱基消耗两分子ATP,方向为沿5 →3 模板链延伸,解 螺旋酶有多种类型,其中DnaB为大肠杆菌参与DNA复制的解螺旋酶;T抗原为真核生物DNA复制的解