人工进化丙型肝炎病毒C和E1区噬菌体展示文库的构建及初步筛选.pdfVIP

人工进化丙型肝炎病毒C和E1区噬菌体展示文库的构建及初步筛选.pdf

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• 666 . 中华肝脏强国忘2【刷年9月第 14 卷第9期 CIûn J Hepe则, 协ember 2006 , Vo1 14 , NO.9 -病毒性肝炎 人工进化丙型肝炎病毒C 和El 区噬菌体 展示文库的构建及初步筛选 赵南涛赁占1生李谨革 玉春雨魏欣李尤J已白雪+凡 E锢.J 目的 构建人工进化丙型肝炎病毒(HCV) C和EI 区基因囔菌体展示文库.并进行初步街选.方法 应用 DNA~Ul技术迸行不同基因型的HCV C和EI 区基囚的人工避化.克Äl于噬菌体戴体. 以辅助噬前体MI3K07援救后, 构lt瞩目E体展示文库. 应用HCV C 租EI 区曲曲克瞌扰你进行初步筛选.随机选取筛选后的20个噬简体克隆,用高滴度 HCV阳性血清通过双抗体夹心酶联免疫吸附法遂行11\:原抗体结合反应,以正常人血清作为对照, •• 人工迸化HCV C和EI 区噬..体展示文库库容达1.64 x 10,重在ll..为 0.86,以C和EI 区尊克隆抗体淘筛4 轮,噬菌体艘示文~尊重j 特异性富集. 筛选获得12个阳性克隆. .~ 所构漫的ltI菌体展示文库的摩容和多样性符合筛选的要求.筛选获得的 阳俭究障具有役好的t1t:原抗体结合反应活性. 亵现出较好的亲和力. u‘·词】 肝炎病毒, 丙里, 定向分子送他. 细商噬黯体‘肤库 Tbt ωastructlon aød prfmary 属四tnlDa or a phap dlsplar U睛r8巧。f HCV C and Elltn臼tvolvtd 101血an ar世JIdaI p8ttt r1l ZHAO Fu. I4f), 1M ZIuvt Jheng. U Iln-8, WANG Chun.川, WEIXin, U Guang)1也 BAIXu . -f41L PLA C.nuT of DløgnoJís ønd 7rratmentfor 11功cllo Dís.OJU, Tøngdu HOJpitat Fourth Military Mtdical Unlvtrslry. XIan 7J()()J8, China Corrtspondlng author: IJA Zhan.sheng, Email:jiauhlø.如mu.tdu.cn Co.corrtspondln8 aUlhor: U Jin.gt . Emall: oon2Jl líÞfmmu ..du.cn IAbllnct) Obj配llve To conslJUct and 阳时n n primarily phage dì叩lay library of HCV C and El genes evolved 明白 an anificiol pattern. Mtlbods 1Wo genes of about 1kb wi也 different genotypes were ev创刊d by DNA shuffling. The re- 辑mbled HCV C and El genes we四cloned inlO a pbage vector. Aft町being rescued with helper phoge M13K07 , a pbage display library w酷ω皿tructed.τben 也e UbI回y wu screenω 明白阻咀.cand El McAb . Pouble-antibc对y sand、.icb enl.yme- Iinkod immun崎耐协刷阻啕(DA5-ELlSA) w幽幽rried out on twenty indi四ωa1 pbage clones 蚓剧阳岛mly 回de胆t 白白 bindin 阳、d reactive 坦划时ty 明白 higb-ti田HCV.阴阳ive 町a. Noonal 田a were used 回回ntrols. Results 丁k例age dìsplay 1i阳市Y of HCV C and El ger阳whicb evolved 响曲回缸创icia1 阳ttern w画∞皿struc田4节阳『曲田ityan回unted 10 I刷X IC萨­ .nd 6 percent 01 tbe clones con凶ned Cand EI ge瞄õ. Afì町fo乱

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