Enzyme3淀粉酶於酶催化反应中之抑制现象.ppt

Enzyme 3 : 澱粉酶於酶催化反應中之抑制現象 原理 水解 水解 水解 水解 水解 澱粉 → 紫色糊精 → 紅色糊精 → 無色糊精 → 麥芽糖 → 葡萄糖 (遇碘為藍色) (遇碘為紫色) (遇碘為紅色) (遇碘為無色) (遇碘為無色) (遇碘為無色) 在酵素催化反應過程中，其激活劑或抑制劑可加速或抑制酵素的活性，如氯化鈉在低濃度時為唾液澱粉酶的激活劑，而硫酸銅則是它的抑制劑。 目的 本實驗利用水解不同階段澱粉與碘有不同顏色反應，定性觀察不同金屬離子在澱粉酶催化反應中之促進或抑制現象。 澱粉經酵素催化水解為葡萄糖的不同階段與碘作用之顏色反應如下： 步驟 a b c d e f (2)分別在每組的a~f試管各加入0.5％澱粉溶液200μl (3)再分別在在每組的a~f試管各加入100μl, 100Mm磷酸緩衝 液(pH=7) (4)a試管加入200μl ddH2O (對照組) 而b~f 試管加入200μl, 0.5％ α－amylase a b c d e f a b c d e f a b c d e f (1)分別取24支試管，每6支分成一組，共分為4組 A group B group C group D group (5)A~D組各加入不同濃度之4種金屬離子(Na+、K+、Ca2+、Cu2+) : a b c d e f a b c d e f a b c d e f a b c d e f A group B group C group D group * a、b試管加入100μl ddH2O * c試管加入100μl 0.2%之金屬離子 * d試管加入100μl 0.4%之金屬離子 * e試管加入100μl 0.6%之金屬離子 * f 試管加入100μl 1.2%之金屬離子 Na+ K+ Ca2+ Cu2+ 請注意：各組試管所加之金屬離子如下： 將試管搖晃均勻，置於37℃水浴30分鐘 取出冷卻，再滴碘液（碘化鉀-碘液）1滴，觀察顏色變化 測量OD610下之吸光值 結果 問題 本實驗中，各種金屬離子對酵素作用的影響 本實驗中，各種金屬離子對酵素作用的最適 濃度 碘液與澱粉作用原理 酵素的抑制方式 舉出一種酵素抑制劑及其作用機制 補充資料 金屬酶(metalloenzyme) 性質：一種含有一個或多個金屬離子作輔助因子的酶。 按照金屬離子和酶蛋白結合的穩定程度又可分為金屬酶和金屬激活酶兩類。 在金屬酶中，它們牢固地結合在一起，金屬離子通常為活性中心。 在金屬激活酶中，它們鬆散地結合，但金屬離子卻是酶活性的激活劑。 金屬酶種類很多，以含鋅、鐵、銅的酶最多，也有含鉬、錳等其他金屬離子的酶。 例如細胞色素氧化酶除含有鐵離子還含有銅離子。 Alpha-amylase structure * The active site of alpha-amylase contains a trio of acidic groups (colored white and red) that do most of the work. In the amylase shown here (PDB entry 1ppi), glutamate 233, aspartate 197, and aspartate 300 work together to cleave the connection between two sugars in a starch chain. This structure contains a short chain of five sugar units (colored yellow and orange) bound in the active site. The site of cleavage is shown in pink. A calcium ion, shown as the large gray sphere, is found nearby where it stabilizes the structure of the enzyme. A chloride ion, shown as a green sphere, is bound underneath the active site in many amylases, where it may assist the reaction.  * The active site of alpha-