抗A型流感病毒聚合酶碱性蛋白1多克隆抗体的制备和鉴定.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 秦玉洁 等/抗A 型流感病毒聚合酶碱性蛋白 1 多克隆抗体的制备和鉴定 105 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn January 25, 2016, 32(1): 105−113 DOI: 10.13345/j.cjb.150103 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 A 1 秦玉洁，张廷虹，叶昕 100101 , , . A 1 . , 2016, 32(1): 105–113. Qin YJ, Zhang TH, Ye X. Preparation and detection of anti-influenza A virus polymerase basic protein 1 polyclonal antibody. Chin J Biotech, 2016, 32(1): 105–113. 摘 要: 流感病毒属于正黏病毒科，为有包膜包裹的单股负链RNA 病毒。它的8 个基因片段编码至少 16 种病 毒蛋白，其中3 个蛋白组成流感病毒的聚合酶复合体。流感病毒聚合酶碱性蛋白1 (PB1) 是该复合体的组分之一， 在病毒的转录、复制及重配中发挥重要的作用。为研究其功能，构建His-PB1 (aa 550–755) 融合蛋白原核表达质 粒，IPTG 诱导融合蛋白表达，通过镍柱亲和将其纯化，然后作为抗原免疫家兔。对抗血清进行间接ELISA 检测， 表明抗体效价可达 1 ∶100 000。兔源PB1 蛋白抗血清经亲和纯化后，用于免疫印迹检测流感病毒WSN 毒株PB1 蛋白以及外源转染的FLAG-PB1 蛋白，结果表明该PB1 抗体具有良好的特异性，同时也能特异性识别其他亚型 的A 型流感病毒的PB1 蛋白，为进一步研究流感病毒PB1 蛋白的功能奠定了基础。 : 流感病毒，PB1 ，多克隆抗体，亲和纯化 Received: March 7, 2015; Accepted: May 4, 2015 Supported by: National Basic Research and Development Program of China (973 Program) (No. 2011CB504705), Key Projects in the National Science and Technology Pillar Program (No. 2013Z. Corresponding author: Xin Ye. Tel: +86-10 E-mail: yex@ (973 ) (No. 2011CB504705) (No. 2013Z 106 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech January 25, 2016 Vol.32 No.1 Preparation and detection of anti-influenza A virus polymerase basic protein 1 polyclonal antibody Yujie Qin, Tinghong Zhang, and Xin Ye Institute of Microbiology , Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China Abstract: Influenza A virus is an enveloped virus that belongs to the Orthomyxoviridae family. It has 8 negative RNA segments that encode 16 viral