免疫测定方法学和临床应用.ppt

免疫测定方法学临床应用 免疫测定方法学临床应用 免疫分析技术简介 乙肝病毒标志物定性、定量检测常见问题 抗HCV检测问题 ANA.ENA检测问题 TP-Ab检测问题 TB-Ab检测问题 免疫分析技术 早期的免疫分析技术: 免疫扩散、免疫电泳、直接及间接血凝、被动血凝、补体结合实验 特点:这些检测方法成本低、结果易于判断、技术上便于掌握,但不便于免疫检测自动化 后来的免疫分析技术: 放射性核素标记、荧光免疫标记、酶免疫标记、稀土元素标记及化学发光分子标记 特点:快速、灵敏、特异、易于测定等实验室的免疫检测自动化奠定了基础 放射免疫的创立 1959 美国Yalow Berson 1960 英国 Ekim’s 1977 获诺贝尔医学生物学奖 放射免疫的精髓 R：放射性核素示踪 高灵敏 不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号 (标记物的放大效应) 放射免疫面临的挑战 半衰期短，限制了药盒使用寿命 由于标记物的不断变化，带来药盒批间、批内较大的差异，标准曲线无法保存备用 反应时间过长(数小时至过夜) 结果测量依靠时间累计，至少每一样品一分钟 新技术的挑战 标记免疫方法 自动标记免疫分析的优点 一、消除手工操作的误差 二、灵敏度高、稳定性好 三、速度快 四、当天/隔天报告 实现短时间反馈 提高临床诊断效率和质量，有效降低总医疗费用 乙型肝炎病毒 乙肝的诊断主要以实验室检测乙肝表面抗原（Hepatitis B Surface antigen , HBsAg ）为主，检测方法主要有酶免疫法、反向间接血凝法、放免法、化学发光法、免疫荧光法等，目前应用较广、较普及的是酶免疫一步法和化学发光定量法。 HBsAg 的酶免疫检验方法根据反应模式可分为“一步法”和“两步法”两种方法。“一步法”是将待测样品和酶标记抗体同时加人到反应孔中进行反应，从而达到快速的目的，一步法”存在产生“前带现象”的可能 。 定性？定量？ 定性测定常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果；半定量测定虽介于定性和定量之间，但从严格意义上来说，其仍属于定性测定，只不过其对定性测定中的“阳性”作了进一步的分级，即所谓的强阳性·阳性·弱阳性的区别 定量测定的结果则以浓度（如IU/L、ug/L等〕的方式表达。 定性测定结果确定的依据 定性测定结果确定的依据在于阳性?阴性判定值（Cut-off）的建立， Cut-off 值的确立应尽可能地避免假阳性或假阴性结果的出现。因此卫生部临床检验中心也在应用Cut-off 值时引用了灰区概念以解决定性测定结果的可疑阳性问题。 定性免疫测定的CUT-OFF值与灰区SD1=0.019 SD2=0.628 可疑阳性处理原则 重复测定：同样方法复做一次 确认试验：中和试验：HBsAg 重组免印迹（RIBA）：HCV-Ab 蛋白印迹（WB）: HIV-Ab 结合临床或跟踪随访 定量测定结果的依据 系列浓度标准品测得的剂量反应曲线，即通常所谓的标准曲线。 由于定量酶免疫测定中的剂量反应曲线与生化测定中的标准曲线相比，一般均为非线性的，变异较大，故不宜称为标准曲线。 不同的数学模式可用来改善上述剂量反应曲线绘制的精密度，从而能以较少的数据和计算获得较为准确的结果 定性测定与定量测定分别 Elecsys 与酶免法的主要区别 检测灵敏度 Elecsys HBsAg:0.09ng/ml对酶免法(0.5~50ng/ml)，因此酶免法有较高的阳性漏检率，尤其对于早期患者； Elecsys HBsAg不存在灰区，减少重测，结果更可靠。 结果的精密度 5% CV值与20% CV值的差别, 酶免法结果可靠性差。 出结果时间 来样本即检测出结果(18分钟-27分钟)与集中标本检测后出结果（3~4小时）报告的分别。 酶免法与国际标准值未接轨 丙型肝炎的实验室诊断 丙型肝炎(Hepatitis C，HC)是丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)引起的世界范围内流行、且严重危害人们身心健康的传染病之一, 尤其在亚洲、非洲等一些发展中国家,流行率、发病率均较高。 临床特点：感染者中50-85％发展成慢性或持续感 染、进而部分发展成肝硬化和肝癌。 因此，早期诊断仍是防止传播的有效手段。 一、抗-HCV IgG检测 酶联免疫吸附实验 凝集实验 放射免疫实验 快速检测技术 其它检测技术：免疫荧光、化