炮制前后何首乌蒽醌类含量的比较研究.docVIP

　　炮制前后何首乌蒽醌类含量的比较研究 【摘要】 比较用相同方法炮制的不同产地何首乌中蒽醌类含量的差异。［方法］采用紫外分光光度法，以0.5％醋酸镁-甲醇溶液显色测定蒽醌含量，采用HPLC方法测定大黄素的含量。［结果］炮制后，何首乌中结合蒽醌类成分明显降低，总蒽醌类含量有所升高，但结合蒽醌占总蒽琨的比例明显降低；结合大黄素含量明显降低，总大黄素含量有所升高，但结合大黄素占总大黄素的比例明显降低。［结论］炮制对何首乌中蒽醌类成分的含量有影响。相比生首乌，制首乌中结合蒽醌含量明显降低，而总蒽醌含量有所上升；临床发现生首乌具有一定毒性而制首乌毒性较小，这可能和炮制后结合蒽醌含量降低有关系。 【关键词】 何首乌；大黄素；结合蒽醌；总蒽醌 ；毒性 何首乌(PolygonummultiflorumThunb.)为常用中药，药用 历史 悠久。生、制首乌性味相同，功效主治不同。有研究表明生首乌和制首乌相比，生首乌结合蒽醌含量高，游离蒽醌含量低；生首乌的泻下作用主要是由结合蒽醌引起的，经炮制后，结合蒽醌水解成为游离蒽醌，故其泻下作用明显降低，临床功效也发生了变化［1］。本实验采用相同的炮制方法对不同产地的何首乌进行处理，比较炮制前后不同产地的何首乌中蒽醌类成分含量的变化情况，为临床生制首乌的不同应用提供实验依据。 　　 1 仪器和材料 仪器：中药粉碎机（DJ-041，上海）；紫外分光光度计（Lambada 12型，德国）；药材：何首乌药材分别购自：①浙江中医药大学中药饮片厂（批号产地：浙江）；②北京同仁堂（批号产地：四川）；③胡庆余堂（批号产地：贵州）；④方回春堂（批号产地：广东）。对照品：1，8-二羟基蒽醌对照品（含量测定用，批号：0829-9702， 中国 药品生物制品检定所）；大黄素（含量测定用，批号：110756-200110，中国药品生物制品检定所）。 　 　2 实验方法 　　2.1 UV-VIS法测定总蒽醌和游离蒽醌的含量 　　（1）制首乌的制备：取四个产地的何首乌各250g，参照中药材炮制规范，采用蒸法炮制所得［2］。（2）对照品的配制：精密称取置五氧化二磷干燥器12小时的1，8-二羟基蒽醌对照品3.62mg，以甲醇溶解制成0.1448mg/ml的对照品溶液。（3）供试品溶液的配制：取以上炮制好的制首乌和生何首乌各0.3g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，水浴加热1h，取出，放冷，擦干再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。（4）游离蒽醌供试品的配制：取上述供试品溶液10ml，用氯仿萃取至无色，每次20ml，合并氯仿层，回收溶剂，备用。（5）总蒽醌供试品配制：取上述供试品溶液10ml，置100ml的圆底烧瓶中，挥干甲醇，加8%盐酸溶液10ml，超声2min，加氯仿20ml回流2h，放冷，用氯仿萃取3次，每次20ml，合并氯仿层，回收溶剂，备用。（6） 最大吸收波长的选择：取对照品溶液2ml和样品溶液1ml，置10ml容量瓶中，挥干甲醇液，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，定容至刻度，显色20min，于400-700nm扫描，样品和对照品的最大吸收波长在506-511nm，且峰形平缓，综合考虑，选择509nm作为测定波长。（7）线性范围：精密移取对照品溶液0.25、0.5、0.75、1.0、1.25 ml，置10ml容量瓶中，挥干甲醇，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，定容至刻度，显色20min，在509nm波长下测定吸光度。以浓度（μg/ml）为横坐标（X），吸光度为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为：y=0.0505x-0.026，R2=0.9975。见图1。(8) 含量测定 参照蒽醌类成分的醋酸镁比色法，考察确定以0.5%醋酸镁-甲醇溶液为显色剂，显色20min，在509nm波长下测得蒽醌含量，结果见表2。表2 不同产地何首乌炮制前后蒽醌含量（略） 　　2.2 HPLC法测定大黄素含量 　　（1）色谱条件：色谱柱：Ultimate XB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇-水-磷酸（80：20：0.05）；检测波长：254nm；柱温：25℃；流速：1.0ml/min。此条件下大黄素、大黄素甲醚和其他成分可达到基线分离，理论塔板数按大黄素峰计不低于4000。（2）供试品溶液的制备：取炮制好的制首乌和生何首乌，打粉，各取0.3g，称定重量，置圆底烧瓶中，精密加入50ml甲醇，称定重量，水浴回流1h。取出，放冷，擦干，称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，得供试品溶液。游离大黄素样品的制备：取供试品溶液过0.22μm滤膜，即得游离大黄素的样品溶液。总大黄素的样