钝齿棒杆菌CD945丙酮酸羧化酶基因的克隆、序列分析及表达.pdf

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 %’ (! - (# 年 月 #$$ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,’ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 钝齿棒杆菌!#$% 丙酮酸羧化酶基因的克隆、 序列分析及表达 王 绛 刘阳剑 王 宇 张英姿 余志华 丁久元 （中国科学院微生物研究所微生物生物技术中心 北京0$$$4$ ） 摘 要：以钝齿棒杆菌（ ）突变株 的基因组为模板，运用 方 !#$%’()*#+,- )#%(*,- CDA!3 ECF 法，扩增出丙酮酸羧化酶的基因片段。核苷酸序列分析结果表明，该片段全长23BG*，以H.H 为起始密码子，编码一个 。该 的核酸序列与 ， IFJ IFJ !#$%’()*#+,- ./,*(-+),- 0$)’()*#+1 ,- 2-.-(*+2 以及 3())4(#-$)2 )#5+2+( 的丙酮酸羧化酶结构基因相比，相似性分别为 、 和 。由 推导出的氨基酸序列与上述属种的丙酮酸羧化酶相比， A4 K## L 2# K!0L !A K20L IFJ 同源性分别是 、 和 。经证实对于酶的催化活性至关重要的一些保守 AA K$ L 2! K23 L !! K$! L 区域，如).E 和生物素的结合位点等，在该氨基酸序列中都存在。将该基因片段转化钝齿棒 杆菌（ ） ，利用 处理细胞和苹果酸脱氢酶偶联测定相结合的方法，进行 ! ( )#%(*,- CDA!3 C.)M 酶活力的分析，结果表明，重组子与供体菌相比，丙酮酸羧化酶的活力提高3 倍。 关键词：棒杆菌，丙酮酸羧化酶，氨基酸 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） NB42 ) $$$0120BA #$$ $#1$#0!1$2 丙酮酸羧化酶（ ， ）是一种重要的生物素酶，广泛分布于哺乳动 E+?O7P/ @7+GQ’7/ ERC 物、真菌、植物组织和许多细菌中。在细菌中，它和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（ ）一样， EEC 对三羧酸循环中间产物草酰乙酸（ ）的补充有重要作用。在荚膜红细菌（ I)) 647’()*# ［］ ［］ 0 # ） 中， 是唯一参与回补反应的酶；而在大肠杆菌（ ） 等细菌 )(82,/(*,2 ERC 92)4#+)4+( )/+ 中，只有 参与 的补充；仅有少数细菌，如谷氨酸棒杆菌（ E