非试管繁殖–基础.doc

一 母本培养是植物非试管克隆的基础 1．母本园建设与管理是实现生根一致性的关键 植物非试管克隆技术是植物离体材料利用自身营养器官叶片的光自养能力,为切口根原基的发育，提供所需的天然激素与营养，这是成活的机理与关键所在，在繁殖生根过程中，叶片充当了组培技术中培养基的作用，也就是说叶片提供了碳源矿质营养与激素，是根原细胞启动发育的能量源与营养源，叶片的生理机能及所含的营养，对于生根起到关键性的调控作用。??? 作为天然培养基的叶片,它的生理功能受母本植株的生长发育影响是最大的，如太幼嫩的叶片，光合面积小，光合产物积累少，会出现碳源的不足，从而影响生根。另外，过于幼嫩的材料C/N小,矿质营养含量不齐全或不平衡，也会影响根源基的发育。过于幼嫩的材料虽然有高的生长激素含量，但细胞分裂素含量却过低，也对于切口部位细胞的分裂受到影响，它与组培一样要求有适宜的生长激素与细胞分裂素间的合理比例，当碳源充足，矿质营养齐全，内源激素比例合理时，根源基的发育就能正常进行，与组培生根培养的原理一样。??? 在生产中，选择具有含量适宜，活性较强的叶片作为天然培养基是极为关键的。但是，生产中涉及的品种很多，不同的品种它生根培养所需的营养与激素又不相同，就像组培一样，基本培养基相似，但不同的植物间还要靠适当的调节才能适合不同植物的生长，这种调节方法有两种路径来实现，就是母本植株生长发育的人工调控，另外就是快繁时外源营养与激素的补充与调节。如太幼嫩、碳源低的离体材料，或进行补糖处理，但它在操作过程中，常会造成切口病菌的滋生，实际运用效果受到影响。??? 对于过老的或衰弱母本上所取的材料，常会出现内源生长激素匮乏，及矿质营养成分的固定，难以在快繁过程中发挥作用，所以要进行切口的处理，以补充内源激素的不足，越老化的材料，生长激素或其它活性物质处理的时间相对就要延长，而且这种处理是要通过多次科研试验才能获取，否则也会造成盲目性，虽然处理了但药剂种类浓度、时间不适合也影响生根成活。所以在生产上，依靠植物叶片自身所含的最佳营养与激素是快繁基础的基础，只有调控好母本的适合生长状态，使叶片所含的成分适合，活性代谢旺盛，就能使难以把握的药剂处理得以简化，提高快繁的成活率与可操作性。否则在快繁过程中，因不同植株或不同部位、不同叶龄的离体材料要进行分类处理，否则难以达到理想的效果，而这种操作在生产上是存在一定难度的。??? 解决这种材料不一致性给生产带来的问题，可以通过对母本的规范化、标准化管理来实现，如对母本进行大肥大水管理，提高叶片的生理活性与营养物质的含量，通过母本幼化与修剪来提高母本材料的生理整齐度，只有生理状态相似，材料整齐的母本材料，才可用相同的药剂与相同的时间进行处理，这样就有利于生产操作，也有利于整齐地生根与移栽。 ??? 生产上母本园的管理，一定要围绕叶片的生理调控而展开，如定期的追肥管理，合理的配方施肥，土壤的科学灌溉，或者母本园的适当遮荫管理，以及叶片的营养液喷施和激素的调控，母本树修剪及三园配套等技术措施，这些措施的实施都是为了使离体材料的叶片有最佳的天然培养基成份。只有叶片本身具有最佳的天然培养基成分，再通过科学的环境控制及药剂调节与养分补充，才可以使根原基因启动发育成完整的植株。 母本园是快繁时用于采集离体材料的植株，在快繁工程启动培育第一批第一代苗时，往往因母本的生长不一致，以及采集材料时离体材料在母本植株上位置的不一致性，导致快繁时，材料的发育不一致，表现为生根及长势参差不齐，或成活率不稳定现象。 为了获取整齐而且有活力的离体材料，要求母本园的建立需采用“三园配套轮流采集”的模式建园。而且要对母本园实施配方施肥复壮速生栽培，培养出活力强而营养充足的快繁材料。具体实施时可以这样操作：第一代快繁成活的小苗，不宜急于作为商品苗出售，而是把它作为母本苗进行栽植建立母本园，并且把母本园划分为三个区，我们叫三园配套，即三园轮流采集材料。 移栽后的小苗最好栽培在肥水条件较好的地片，或栽植于人工配制的营养土中，也可栽于土壤而且结合营养液滴灌（也叫土耕养液栽培），这样可使苗木多发新枝，健壮枝，在管理中还需加强病虫害的防治，每间隔10～15天进行一次农药防治，也可结合根外追肥进行。对于肥水的管理，一般母本园每隔10～15天进行一次土壤追肥或滴灌施入。萌芽力差的品种或长势弱的还可用40ppm的920喷施，以促进植物茎的生长，也可使一些处于休眠状态的芽快速萌发生长。这样可大大加快苗木生枝长叶的速度,也可使植物的童性得到诱发,使离体材料的细胞活性增强,切口愈合与生根都会加快。 技术操作时，可对三园进行人为标定，分别设一区、二区、三区，第二批苗快繁时可从一区取材，并且采集材料后要追施还阳复壮肥，第二批快繁时可从二区取材，同样采集后要施复壮肥，第三批从三区采集快繁