青霉素酰化酶的分离纯化和固定化研究新进展.pdfVIP

第36卷，第 3期 安 徽 化 工 Vo1．36,No-3 7 2010年 6月 ANHUICHEMICAL INDUSTRY Jun．2010 青霉素酰化酶的分离纯化和固定化研究新进展 杨 正 (安徽化工学校，安徽 安庆 246005) 摘要：青霉素酰化酶又称为青霉素酰胺酶或青霉素氨基水解酶，主要从大肠埃希菌胞内酶和巨大芽孢杆菌胞外酶获得，该酶已大规模应 用于工业生产 13一内酰胺类抗生素的关键中间体和半合成 B一内酰胺类抗生素。主要介绍了青霉素酰化酶固定化技术的进展，讨论了 不同固定化技术的特点，并展望了固定化青霉素酰化酶的发展前景。 关键词：青霉素酰化酶；分离纯化；固定化；载体 中图分类号：TQ456；TQ426．97 文献标识码：A 文章编号：1008—553X(2010)03—0007—04 青霉素酰化酶广泛应用于半合成抗生素及中间体 小差别的乳浊液。膜分离技术在酶分离技术中主要采用 的制备、手性药物的拆分和多肽合成等方面。它既能催 超滤法，使溶液在静压作用下通过孔径非常小的滤膜， 化青霉素及其他抗环酸水解去链 ，生产半合成 13一内酰 溶液中分子量较小的溶质透过薄膜，而大分子被截留于 胺抗生素的中间体6一APA、7一ADCA，又能催化6-APA 膜的表面。超滤膜一般 由一层较薄的功能膜与较厚的支 和7-ADCA与侧链缩合生产多种半合成 B一内酰胺抗 撑膜组成。功能膜决定了膜的孔径，而支撑膜提供机械 生素。高效固定青霉素酰化酶能提高酶对温度、pH值、 强度及抵抗静压力。泡沫分离的基本原理是将气体通人 溶剂极性和稳定性，将成为拓宽青霉素酰化酶在工业中 含多种组分的溶液中，由于这些组分表面活性的差异， 应用的必然选择和关键。为此，各国制药业都非常重视 在溶液表面部分组分会形成泡沫，泡沫中含有较多的表 青霉素酰化酶的分离纯化和固定化研究。 面活性组分，因而泡沫的组分种类及含量与溶液中的都 1青霉素酰化酶的分离纯化 不相同，从而使溶液中的组分得以分离。在泡沫分离过 1．1传统的分离纯化方法 程中，酶属于较易吸附在气液表面的组分，容易促进泡 为制备高活力的固定化酶，必须从发酵液中分离纯 沫结构的稳定。泡沫分离能够提高酶蛋白的富集率和提 化出高浓度的青霉素酰化酶。一般包括三个基本步骤：抽 取率。 提、纯化、结晶或制剂。下面就这个过程作一简单介绍。 1．1．2 抽提 1．1．1预处理及 固液分 离 抽提通常采用沉淀法。沉淀法包括盐析、有机溶剂 ① 细胞破碎 沉淀、聚合物絮凝沉淀、金属离子络合沉淀、亲和沉淀 目前工业上常用的破碎方法有高压均质器法、溶菌 等。盐析常用硫酸铵做盐析剂，能够沉淀大多数的酶，且 酶处理法及超声波破碎等。其中以高压均质器法和溶菌 对酶没有破坏作用。有机溶剂沉淀一般会使酶变性失 酶处理法使用较为广泛。高压均质器法操作相对简单，但 活，因此用有机溶剂处理时最好在0oC以下进行，且沉 对设备及操作条件要求较高，相对能耗较高；溶菌酶处理 淀后的酶不易放置过久，应尽快加水溶解。甲醇、乙醇、 法操作较为复杂且耗时较长，但对设备没有过多要求。 异丙醇为常用的沉淀剂 ，其中乙醇的亲水性好 ，可防止 ② 固液分离 酶变性，且酶在其中的溶解度不高。聚合物絮凝沉淀是 一 般采用离心法、膜分离技术及泡沫分离。离心分 利用小分子聚合物与酶分子争夺水分子，从而使酶沉淀 离过程可分为离心过滤、离心沉淀和离心分离三种类 下来。聚乙二醇是一种常用的沉淀剂，在水溶液中，其浓 型。过滤式离心机一般处理悬浮颗粒较大、固体含量较 度可达 50％，