分光光度计的原理.pdfVIP

(一)基本原理 分光光度法是利用物质对某种波长的光具有选择性吸收的特性建立起来的 鉴别物质或测定其含量的一项技术。当一束单色光通过溶液时，一部分被吸收， 一部分则透过溶液。设入射光强度为Io。，透射光强度为It，，则透光度T=It／Io ，吸光度(A)或光密度(O．D)或称消光度(E)则可表示为A=-lgT。根据Lambert— Beer定律，吸光度与溶液的浓度成正比，与光束通过溶液的距离(即光程)成正比 ，用数学表达式表示为： A=KLC 式中C代表该物质的浓度，L代表光程，一般以cm表示，K为摩尔消光系数，即 当溶液浓度为lmol／l，光程为1cm时所测得的一定波长下的吸光度。 由于单色光透过溶液时，不仅被待测物质所吸收，而且还被比色容器与溶剂 以及其它试剂吸收一部分，这部分需用空白管消除(空白液的做法即用与样本相 同的一切试剂，而不含被测定的物质) (二)波长的选择： 波长的选择一般是