区试DNA培训-赵久然.ppt

一、国内玉米品种现状 二国内玉米品种鉴定现状 三、国内玉米DUS测试情况 五、承担玉米DNA指纹鉴定相关研究项目 分子标记技术在玉米新品种选育及种质鉴定中的应用研究（北京市重点、国家科委重点及地方攻关，1995-1999） 应用分子标记选配强优势玉米杂交组合新方法研究（北京市科技新星,1995-1998） 玉米种子DNA指纹纯度及真伪鉴定技术应用推广（北京市农委,1999-2000） 华北农作物核心种质资源研究与利用（北京市科委重大,2001-2004） 应用分子标记技术进行玉米亲子鉴定研究（北京市科技新星,2001-2004） 玉米DNA指纹鉴定试剂盒的开发（北京市科技新星,2003-2005） 中国玉米新品种DNA指纹库构建研究（北京市科委重点,2003-2005） 玉米品种权保护中的分子标记技术研究（国家百千万人才，2005-2007） 超级玉米种质创新及中国玉米标准DNA指纹库构建（北京农业育种基础研究创新平台，2005-2007） 玉米品种DNA指纹鉴定方法（农业部标准，2004-2005） 玉米品种纯度SSR检测方法（国家标准，2004-2005） 玉米品种资源收集及新品种选育（2005.1-2007.12，北京市科委重大） 玉米第六染色体抗病基因富集区域的功能基因组学研究（2006.1－2008.12，北京市自然基金重大） 基于毛细管电泳五色荧光系统的高通量玉米核心引物复合扩增体系的建立 (2007.1-2009.12, 青年骨干人才) 分子标记的类型 各种分子标记方法比较 2.针对SSR标记存在问题进行SSR技术体系优化 SSR技术体系优化 SSR标准操作流程 毛细管电泳及五色荧光检测－ABI3730XL 五色荧光扫描结果 3.确定一套核心引物 DNA指纹分析方法的种类及发展 建库用核心引物评估指标 玉米核心引物筛选技术路线 4.通过多重PCR研究提高建库效率 多重PCR的概念及分组原则 多重PCR试验结果 5.制作玉米DNA指纹纯度及真伪检测复合扩增试剂盒 6. 制定一套DNA指纹标准化实验规程 标准化是DNA指纹库建立及应用于品种鉴定实践的前提和基础 DNA指纹库能否应用的关键是不同实验室对同一样本测试的基因型必须完全一致，数据具有可比性 人类DNA指纹库构建情况 美国CODIS系统：13个STR标记 英国：6个STR标记 欧洲：7个STR 标记 我国玉米DNA指纹库构建 承担农业部国家区试玉米DNA指纹鉴定方法标准及管理办法制定 承担农业部品种权保护玉米DNA指纹鉴定方法标准制定 参与国际UPOV的关于“分子标记选择与指纹库构建”的BMT指南的修订 已制定的DNA指纹相关检测标准 7.利用杂交种果皮DNA获取母本父本自交系指纹 基本原理 玉米子粒的果皮是由子房臂和珠被细胞发育而来的，其基因信息完全继承母本，没有父本的基因成分 在不提供亲本的情况下，只要有纯度较高的杂交种种子，分离提取其果皮DNA，扩增得到的果皮DNA指纹能完全代替母本指纹，作为母本自交系保护的依据 由于采用的SSR标记是共显性标记，在得到杂交种和母本DNA指纹后，可推测出父本DNA指纹，也可为父本自交系保护提供依据 8.确定是否冒用他人－亲子鉴定 为确定待检玉米杂交种是否冒用了他人某一自交系，可对杂交种和争议亲本自交系进行亲子鉴定，明确二者的亲子关系 亲权指数 PI=X/Y＝1/p（指争议亲本为杂交种亲本的可能性是随机亲本为杂交种亲本可能性的多少倍；p为基因型频率） 相对亲权概率 RCP=PI/(1+PI)=1/(1+p) 累积RCP=∏PI/(1+∏PI) 鉴定标准： 认定标准：PI2000; RCP99.99% 排除标准：2个以上位点不符合孟德尔遗传 9.依赖性派生品种鉴定 派生品种概念： UPOV公约1991年文本中首次提出 需同时具备以下三个特征： 从原始品种依赖性派生，同时又保留表达由原始品种基因型或基因型组合产生的基本特性 与原始品种有明显区别 除派生引起的性状有差异外，在表达由原始品种基因型或基因型组合产生的基本特征特性方面与原始品种相同 天然突变或诱变、体细胞无性变异、从原始品种中连续回交、遗传转化、转基因等 10.确定品种DNA指纹鉴定标准 真实性判定标准 采用农业部行业标准《国家玉米区试品种一致性及真实性DNA指纹检测技术》 先用20对基本核心引物检测，获得所测品种在20个引物位点的DNA指纹谱带数据，利用20个位点的DNA指纹谱带数据进行品种间比较： a)品种间差异位点数≥2，判定为不同品种； b)品种间差异位点数＝1，判定为高度相近； c)品种间差异位点数＝0，判定为疑同品种。 对b)和c)的情况，继续用20对扩展核心引物进行检测，利用40个位点的DNA指纹谱带数据进行品种间比较： 品种间差