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染色体畸变04350
动物骨髓细胞染色体畸变分析 主讲：刘彩霞 实验目的 学习动物骨髓细胞染色体标本制作 了解动物体内染毒及染色体畸变类型 染色体数目的改变 1 非整倍体：亚二倍体或超二倍体。 2 多倍体：染色体成倍增加。 3 内复制：包膜内的特殊形式的多倍化现象。 染色体结构的改变 1 断裂：损伤长度大于染色体的宽度。 2 微小体；较断片小而呈圆形。 3 有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。 4 无着丝点环：成环状结构。 5 单体互换：形成三辐体、四辐体或多种形状的图像。????????????????? 6 双微小体：成对的染色质小体。?????????????????? 7 裂隙：损伤的长度小于染色单体的宽度。 8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等 实验原理 用秋水仙碱处理细胞，细胞会停滞在有丝分裂的中期相，通过低渗使细胞膨胀，染色体分散开，然后固定，染色，在油镜下观察。 关键：低渗时间 试剂 缓冲液： PBS 低渗液： 0.075mol/L KCl 固定液：甲醇3份＋冰醋酸1份 染色剂： 姬姆萨染色液 实验设计 1 6-10只大/小鼠,♀♂各半 LD50 ——1/4、1/8、1/16，或最大耐受剂量为最高剂量+三个剂量，经口2～4次，间隔24h, 末次给受试物后18～24 h取材。 3 （-）（+） 1 处死 2 取股骨，剪开关节面，5ml PBS冲洗。1500r/min离心10min，弃上清。 3 打散，加入37℃ 0.075mol/L KCL 6ml，37℃低渗20min。 4 加固定液2ml，1000r/min离心10min，弃上清。 5 重悬，加固定液4ml混匀，放置15min，1000r/min离心10min，去上清。 6 再固定一次，去上清，留约0.5ml。 固定 7 重悬细胞，滴加于载玻片上，干燥 8 10％的姬姆萨染液染色10min，取出清洗 染色 低倍镜下选择分散良好，细胞未破裂的中期分裂相，油镜下观察并记录染色体结构异常和数目异常细胞。 阅片 问题： 本实验中的各个步骤需要注意什么？ 良好的低渗 实验报告书写要求 1 实验原理 2 实验内容 3 实验试剂（每种试剂的作用） 4 实验步骤 5 实验结果：对观察到的染色体畸变进行描述 6讨论（问题）
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