基因诊断与基因治疗3.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * 受体介导转移技术示意图 （3）基因直接注射技术 将基因直接注入动物体内，表达基因产物。 如将促进心脏血管生长的基因直接注入实验鼠的心脏，可使其心脏壁内毛细血管增加30%～40%； 将胰岛素基因直接注入鼠骨骼肌细胞，能分泌糖尿病所缺少的胰岛素； 肌内注射凝血因子Ⅸ基因，可产生血友病所需的凝血因子Ⅸ 。 基因直接注射法的优点 排除病毒载体可能潜在的致癌性或其他副作用； 导入的基因不需整合即可表达，避免了反转录病毒载体导入整合后，一旦发生副作用不易中止或逆转的缺点； 基因直接注射法可反复使用，而病毒载体则可能诱导体内免疫应答，致使反复治疗效果下降。 三、基因干预 （gene interference） （一）反义RNA（antisense RNA） 利用反义RNA对体外培养的细胞进行基因表达调控，通常采用的方法有两种： （1）体外合成反义RNA，直接作用于培养细胞，细胞吸收RNA后，发挥作用。 （2）构建一些能转录反义RNA的重组质粒，将这些质粒转入细胞中，转录出反义RNA而发挥作用。 （二）干扰RNA RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象。在此过程中，与双链RNA有同源序列的mRNA被降解，从而抑制该基因的表达。 RNA干扰的机制 RNA干扰过程主要有2个步骤： （1）小干扰性RNA（siRNA） （2）siRNA与细胞内的某些酶和蛋白质形成复合体，称为RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex, RISC)。 该复合体可识别与siRNA有同源序列的mRNA，并在特异的位点将该mRNA切断 长双链RNA被细胞内的双链RNA特异性核酸酶Dicer切成21-23个碱基对的短双链RNA，称为小干扰性RNA（small interfering RNA，siRNA） RNA干扰机制示意图 1. 体外化学合成; 2.用质粒载体或病毒载体可在细胞内稳定地生成。 siRNA的产生 四、基因治疗的应用研究 腺苷脱氨酶(ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶 (PNP)缺乏症 珠蛋白生成障碍性贫血和血红蛋白病 血友病和其他血浆蛋白缺乏症 苯丙酮酸尿症和其他先天性代谢缺陷病 莱-纳(Lesch-Nyhan)综合征 家族性高胆固醇血症 囊性纤维化病 (一)遗传病基因治疗 （二）恶性肿瘤基因治疗研究 （1）通过基因置换和基因补充，导入多种抑癌基因以抑制癌症的发生、发展和转移； （2）抑制癌基因的活性，通过干扰癌基因的转录和翻译，发挥抑癌作用； （3）增强肿瘤细胞的免疫原性，通过对肿瘤组织进行细胞因子修饰，刺激机体免疫系统产生对肿瘤细胞的溶解和排斥反应； （4）通过导入“自杀基因”杀伤癌细胞。 (5) 提高化疗效果的辅助基因治疗：药物增敏 基因治疗； 耐药基因治疗。 （三）病毒性疾病的基因治疗研究 病毒感染人体后可能急性发病，还可以在人体内长期潜伏，造成终身伤害。病毒还是造成先天畸形的重要因素之一。它与某些癌症、自身免疫性疾病和内分泌疾病也存在一定的关联。 临床上对绝大多数病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治疗手段。 1．调节机体免疫应答 （1）将细胞因子(如干扰素、白细胞介素等)的基因，导入机体免疫细胞，激活免疫细胞并促进其增殖分化，增强机体的细胞和体液免疫应答，促进机体清除病毒感染的细胞和游离病毒。 2.抗病毒复制：根据病毒在机体细胞中复制周期的各个环节来设计的 （1）抑制病毒与宿主细胞结合：即阻断病毒表面抗原决定簇与宿主细胞受体间的特异性结合。 （2）干扰病毒基因组的转录起始和调控。 （3）抑制病毒基因组的复制和蛋白质合成。 （4）RNA干扰技术。 五、基因治疗的问题与展望 缺乏高效、 靶向性的基因转移系统 缺乏有效的治疗靶基因 真核生物表达调控机制未完全阐明 缺乏准确的疗效评价 * * * * * * * * * * * * * * * * 一、原癌基因与抑癌基因的检测 二、常见肿瘤的基因诊断 乳腺癌 结肠癌 一、原癌基因与抑癌基因的检测 1．原癌基因的检测 ras 基因家族由H-ras、K-ras和N-ras组成。最常见的突变是第12、13、59或第61位密码子的点突变。 胰腺癌、结肠癌、肺癌