荨麻属植物对骨形成影响的研究.docVIP

　　荨麻属植物对骨形成影响的研究 作者：史丽颖 阎兴国 周渊 唐玲 冯宝民 王永奇 【摘要】 目的观察4种荨麻属植物的8种不同提取物对骨形成的影响。方法以成骨样细胞MC3T3-E1为靶细胞，以表皮生长因子为阳性对照，4种荨麻属植物的8种不同提取物分为50，100，200 μg/ml 3个浓度组，采用CCK-8 (cell counting kit-8) 活细胞计数法测定4种荨麻属植物的8种不同提取物对成骨样细胞MC3T3-E1的增殖作用，同时测定碱性磷酸酶的活性。结果三角叶荨麻根的醇提物，宽叶荨麻全草的醇提物和醇提物水层过D101大孔树脂40%洗脱部分在50到200 μg/ml 的浓度下能显著促进成骨样细胞MC3T3-E1增殖。同时这3种提取物一定程度上也增强了碱性磷酸酶的活性，但无显著性差异。结论三角叶荨麻和宽叶荨麻提取物在体外对成骨样细胞MC3T3-E1的作用提示其在体内可能促进骨形成过程。 【关键词】 荨麻属植物； 成骨细胞； 增殖； 碱性磷酸酯酶； 活性 Abstract：ObjectiveTo study the effect of Eight extracts of four Urtica plants on bone formation. MethodsOsteoblastic MC3T3-E1 cell al groples in the medium. The proliferation effect of EIght extracts of four Urtica plants on clone MC3T3-E1 cells ined ined. ResultsC3T3-E1 cell proliferation. The three extracts also some the root of U. triangularis, EtOH extract and 40% EtOH-H2O fraction acroporous resin from the H2O partition of EtOH extract from the . subsp. laetevirens on MC3T3-E1 cells in vitro suggest that they may stimulate bone formation in vivo as . subsp. laetevirens，滇藏荨麻U. mairei Levl.，裂叶荨麻U. fissa为常用的民族药和民间药，具有祛风通络、平肝定惊、消积通便、解毒等功效，汉族、布依族、傈僳族、藏族等多个民族主要用于风湿性关节炎、风疹等病的 治疗 ［6，7］，而对这4种荨麻属植物的抗骨质疏松作用未见报道。本文以成骨样细胞　MC3T3-E1为靶细胞，考察了4种荨麻属植物的8种不同提取物对其增殖作用的影响，并检测了相应的碱性磷酸酶的活性。 1 材料 小鼠成骨样细胞MC3T3-E1细胞株由日本富山大学医学部宫原龙朗教授提供；表皮生长因子购自日本Funakoshi 公司；前列腺素E2购自日本Biomol International实验室；小牛血清购自美国JRH Biosciences公司；α-MEM为美国I Biomedicals公司产品；活细胞计数试剂盒CCK-8 (cell counting kit-8) 购自日本Dojin实验室。 2 方法 2.1 靶细胞以小鼠头顶骨细胞系MC3T3-E1为靶细胞，采用对照观察的方法，以表皮生长因子为阳性对照，同时设正常对照组（不加药，只加等量细胞悬液和培养基）和空白对照组（不加药和细胞悬液，只加等量培养基）。4种荨麻属植物的8种不同提取物分为50，100，200 μg/ml 3个浓度组，共12组。 2.2 MC3T3-E1细胞培养及形态学观察将MC3T3-E1细胞培养于100 mm培养皿，含10%胎牛血清，50 mg/l青霉素，30 mg/l链霉素的15 mm α-MEM培养基中，细胞浓度为5×105细胞/皿，置37℃，5%二氧化碳培养箱中进行培养，每隔48h进行一次传代培养。将MC3T3-E1细胞接种于24孔培养板上，每个孔加入含10%胎牛血清的α-MEM培养基400 μl，细胞浓度为8×103 /孔。待48 h后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。 2.3 4种荨麻属植物的8种不同提取物对MC3T3-E1细胞增殖的影响［8，9］取上述48 h培养后的细胞，用不含血清的α-MEM培养基冲洗细胞，然后加入含1%胎牛血清的α-MEM培养基，加入各浓度的荨麻属植物的8种不同提取物，各组提取物样品最终浓度分别为50，100，200 μg/ml。另设空白对照组（不加提取物样品，只加等量细胞悬液），生长因