微生物菌种操作方法汇总.pdf

常用的几种微生物接种方法 接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。接种环与接种针为用白金丝或 合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整 个接种环烧红即达到灭菌目的）。在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培 养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括： 启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。不同培养基，接种方法也 不同，分述如下： 一、平板划线接种法（分离培养法） 是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的 细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。 平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。 （一）分段划线法 平板分段划线(左)及培养后菌落分布图 本法多用于含菌量较多的标本。方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面 一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45 度角），然后将接种环置火焰上灭菌， 俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线 时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接 种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得 单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。 （二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。方法是先 将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并 逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。 二、斜面接种法 此法主要用于移种纯菌，使其增殖后用于鉴定或保存菌种。通常是从平板培养物上挑取 某一单独菌落或者从一支已长好的斜面菌种，移种至斜面培养基上，接种步骤如下（以从已 长好的斜面菌种转接为例）： （一）左手拿两支试管，一支为经灭菌的斜面，另一支为已长好的菌种。右手持接种环 或接种针通过火焰灭菌后俟冷，并同时以右手小指和无名指轻轻拔取两支试管的棉塞或试管 帽（先转动棉塞后拔去），夹持于手指间。 （二）将试管口通过火焰数次，并稍转动，以防止外界的污染。 （三）首先将接种环伸入有菌试管，使接种环接触菌苔取少量菌，取出接种环，立即将 管口通过火焰灭菌后将接种环伸入斜面管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而 上的蜿蜒涂布，或直接自斜面底部向上蜿蜒涂布。此步注意接种环不可碰试管壁和接种时不 要划破培养基。 （四）烧试管口，塞好棉塞或盖好试管帽，将接种环插到酒精瓶中。 三、倾注培养法 -1~10-5 本法用于饲料中细菌、霉菌的计数。方法是取原始样品或经适当稀释的（通常是10 稀释）液体 1mL，置于直径 9cm 无菌平皿内，倾入已融化并冷至 50 ℃左右的培养基约 13~15mL ，立即混匀，待凝固后倒置，于一定温度下培养一定小时，作菌落计数。 四、穿刺接种法 此法多用于双糖、半固体、明胶等培养基的接种，方法与斜面接种类似。用接种针挑取 菌落或菌液少许，由培养基表面中央直刺至管底（若为三糖铁并在斜面加以涂布），然后沿 穿刺线拔出接种针（注：接种半固体看动力者不穿刺到底）。 穿刺接种 琼脂固体穿刺生长形状 五、液体接种法 此法多用于单糖发酵试验等，接种方法与斜面接种方法基本相同。以左手持培养基与菌 种管，右手持接种环和拔持棉塞，将挑取的菌落或菌液接种于液体培养基内。 无菌技术： 1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒； 2 、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌； 3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； 4 、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 倒平板操作： 1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 2 、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰； 3、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥