细菌的染色方法.ppt

細菌的染色方法 輔仁大學生命科學系 微生物學實驗 玻片塗抹法 輔仁大學生命科學系 微生物學實驗 玻片塗抹法 玻片先以清潔劑洗淨，再以蒸餾水與95%酒精潤濕後擦乾備用。 以接種環取出一環菌液，塗抹於乾淨玻片中央，再均勻分散之。 玻片塗抹法 若由固體培養基取菌染色，則先在乾淨之玻片中央，取一接種環(或以滴管滴一滴)蒸餾水置於上，再以接種環輕沾培養基上之單一菌落(不要取太多菌)，與水充分混合後，均勻塗抹於玻片上。 塗抹之玻片為半透明、白色的一層膜狀物 玻片塗抹法 風乾後，快速在酒精燈上加熱2~3次，以便將菌體固定於玻片上。 簡單染色法 輔仁大學生命科學系 細菌的染色方法 簡單染色法 取出染色盤，內置少量自來水。 將塗抹好之載玻片， 平放在染色架上， 在塗有菌處滴下結 晶紫(或甲基藍)染料， 作用一分鐘 (染料蓋滿菌體，但 不外溢) 簡單染色法 倒掉染料，用蒸餾水將剩餘染料沖掉，玻片乾後(可以濾紙吸乾)，置於顯微鏡下觀察。 以低倍鏡找出含有菌體的位置，逐次增加倍數， 最後加入一滴油鏡油，以高倍油鏡觀察，並畫圖 紀錄之。 格蘭氏染色法 輔仁大學生命科學系 細菌的染色方法 革蘭氏染色法 將欲觀察之三種細菌的隔夜培養菌液，以接種環均勻塗佈於玻片上 將此玻片平放在染色架上，先以2%crystal violet染液作用一分鐘 革蘭氏染色法 再以蒸餾水將剩餘染料沖洗去除。 革蘭氏染色法 加入Gram Iodine媒染液(Mordant)，作用一分鐘，用水沖洗。 革蘭氏染色法 再以95%酒精進行脫色作用。將玻片斜置於染色架上，由上往下滴入酒精溶液，直到流出的酒精變成無色後，再用水沖洗。 革蘭氏染色法 加入第二種染液3.6%之Safranin (Counterstain)， 繼續作用一分鐘後，用水沖掉多餘之染料，以濾紙吸去玻片上之水份 於顯微鏡下仔細觀察，並記錄細胞之外形與顏色。 內孢子染色法 輔仁大學生命科學系 細菌的染色方法 內孢子染色法 取一接種環之枯草桿菌菌液，均勻塗佈於玻片上，並以火固定之。 內孢子染色法 滴上5%之Malachite Green染液，以蒸氣(80℃)加熱作用約五分鐘(不可讓染液乾掉)，用水沖去多餘染料。 內孢子染色法 再以0.5%之Safranin染料作用1~2分鐘，用水沖洗後， 內孢子染色法 將玻片風乾，以顯微鏡觀察並記錄之。 負染色法 輔仁大學生命科學系 細菌的染色方法 負染色法 將上述三種細菌之菌液，取一接種環之菌量，均勻塗佈於玻片上。 負染色法 在玻片之一端，加上一滴2%Nigrosin染料(或Iodine Ink)。 負染色法 取另一載玻片，以30度傾斜角，將染料往菌體方向推開。 負染色法 待染料風乾後(勿加熱)，以顯微鏡觀察並記錄之。