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2017-05-12 发布于浙江
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实验规范化手册及常用实验技术大全

实验规范手册 2010 年4 月制目录第一章各实验所需主要试剂及溶液的配制 1. 细胞培养1 2. 质粒的提取和纯化1 3. 趋化运动实验1 4. Western Blotting2 5. RT-PCR4 6. 肌动蛋白聚合实验5 7. Matrigel 体外侵袭实验5 8. 免疫共沉淀实验5 第二章实验规范化流程 1. 细胞培养相关技术7 2. 划痕实验8 3. 趋化运动实验8 4. 粘附实验10 5. 肌动蛋白聚合实验11 6. Western Blotting 实验11 7. RT-PCR 实验13 8. 免疫共沉淀实验15 9. 苏木精-伊红染色法16 10. 免疫组化实验17 11. 细胞免疫组化实验18 12. 免疫荧光19 13. Matrigel 体外侵袭实验21 14. 细胞周期检测21 15. RNAi 转染实验22 16. 质粒DNA 转染实验22 17. 转化实验23 18. SCID 小鼠的饲养23 附件1 不同培养容器中细胞数25 附件2 抗体条件26 第一章各实验所需主要试剂及溶液的配制 1. 细胞培养所需： 1×PBS (pH 7.2) ： NaCl 8.00g KCl 0.20g Na PO ·12H O 2.083g 2 4 2 KH PO ·12H O 0.261g 2 4 2 加DDW至950ml，HCL 调节pH至7.2，蒸馏水定容至1000ml，高压灭菌。 2. 质粒的提取和纯化所需： 1) LB培养基：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 加蒸馏水至950ml，调节pH至7.2，蒸馏水定容至1000ml，高压灭菌。 2) SOC培养基：胰化蛋白胨 20g 酵母提取物 5g NaCl 0.5g 加蒸馏水至950ml，至溶质完全溶解后加入10ml 250mmol/L KCl溶液，调pH值至7.0，用蒸馏水定容至1000ml，高压灭菌，在溶液使用前，加入5ml 灭菌的2mol/L 的MgCl2 。待冷却至60°C 以下，加入20ml灭菌的1mol/L葡萄糖溶液。 3) 用于铺盘的含抗生素的LB 培养基：在 100ml LB培养基中加入 1.5g琼脂 (Argrose) ，高压灭菌后冷却至60°C 加入200µl 氨苄青霉素（工作浓度为 100µg/ml），用于铺盘。 3. 趋化运动实验所需： 1) 所需试剂：趋化小室 Neuro probe公司聚碳酸酯膜 Neuro probe公司 - 1 - 人源趋化因子EGF Chemicon 公司 Fibronectin Sigma公司 2) Binding medium (BM)