阿尔茨海默病基因治疗实验研究进展.docVIP

　　阿尔茨海默病基因治疗实验研究进展 作者：孔卫娜 孙祎敏 张丽霞1 苏安英2 柴锡庆 【关键词】 阿尔茨海默病;β淀粉样蛋白;基因 治疗 阿尔茨海默病(AD)主要症状为进行性记忆力和认知力减退。目前，药物治疗仍是治疗AD的主要手段，但现在所开发的药剂多为化学合成药，药物作用位点不专一，特异性弱。相反，采用基因治疗的方法不仅定位准确，作用持续时间长，而且没有非靶器官的副作用，是一种较为理想的治疗方法。此外，虽然研究证实AD是一种多病因介导的疾病，但是脑内β淀粉样蛋白(Aβ)代谢异常造成的Aβ片段聚集沉积引发的级联反应是AD的主要致病原因。Aβ的稳态水平依赖于生成、清除和内流间的平衡，因此，若能通过基因治疗的手段减少Aβ生成或上调酶介导的Aβ降解，促进受体介导的Aβ脑外流，抑制Aβ脑内流，便可有效地治疗AD。 　 　1 降低Aβ生成的基因治疗 　　Aβ由分泌酶水解β淀粉样前体蛋白(APP)产生。体内有α、β、γ三种分泌酶参与APP的降解。α分泌酶的酶切位点位于APP蛋白中部，避免了完整Aβ分子序列的产生，且分解产生的可溶性淀粉样前体蛋白α(soluble amyloid precursor protEin α，sAPPα)对神经细胞具有神经营养和神经保护作用，是正常人体内APP的主要代谢方式;β分泌酶使APP裂解成游离的sAPPβ及仍结合在膜上的CTF99，CTF99再被γ分泌酶水解，生成P3和含有39～42个氨基酸残基的Aβ，Aβ(尤其是Aβ40和Aβ42)聚集形成淀粉样斑块，产生神经毒性。 　　1.1 APP基因 APP基因突变形成新的酶切位点，易为β、γ分泌酶(尤其是γ分泌酶)水解，进而产生大量的Aβ40和Aβ42，促进了淀粉样斑块的形成。用携带siRNA的单纯疱疹病毒载体封闭APP突变基因的表达有效阻断了AD小鼠海马淀粉样斑块的形成〔1〕。 　　1.2 α分泌酶 α分泌酶及β、γ分泌酶两个酶系统对同一底物APP进行竞争。如果α分泌酶活性增强，既生成了对细胞具有营养作用的sAPPα，又减少了Aβ的产生，因此提高α分泌酶的活性或表达，利于对AD的治疗。 　　α分泌酶不是单一的蛋白酶，而是一类膜结合蛋白。金属蛋白酶10(adisintegrin and metalloprotEInase 10，ADAM10)具有α分泌酶的生物学功能。Colciaghi等〔2〕发现在AD患者中，ADAM10的水平降低，且随疾病的进展，其下降程度增加。通过转基因技术，使AD模型小鼠神经元中适度过表达ADAM10基因，sAPPα的分泌增加，淀粉样斑块的生成减少;相反，转染ADAM10突变基因的AD模型小鼠，脑内淀粉样斑块的沉积加剧〔3〕。这些结果在一定程度上提示了ADAM10对于AD具有潜在的治疗作用。ADAM10并非唯一的α分泌酶，过表达ADAM9、ADAM17或ADAM19的细胞，sAPPα的分泌也增加。因此，它们也是α分泌酶的活性成分之一，但其在AD治疗中的潜在作用还需要进一步的研究。 　　1.3 β分泌酶 1999年，Vassar等〔4〕用基因筛选的方法纯化出一种新的、在β分泌酶位点剪切APP的蛋白酶，称之为APP的β位点剪切酶(betasite APPcleaving enzyme 1，BACE1)。细胞实验显示，将化学合成的针对BACE1的siRNA转染APP基因突变小鼠神经元，干扰内源BACE1基因的表达，Aβ的生成下降〔5〕。Kobayashi等〔6〕的研究也发现BACE1基因敲除的AD模型小鼠的大脑Aβ沉积显著降低。构建BACE1 siRNA的慢病毒表达载体，将载体注射到AD模型小鼠海马中，小鼠海马组织BACE1的表达显著下降，Aβ的生成及淀粉样沉积显著降低，小鼠的行为学缺陷也得到一定改善〔7〕。 　　BACE2和BACE1同样具有剪切APP的功能，但它主要在Aβ序列的19Phe20Phe和20Phe21Ala部位进行剪切，破坏完整Aβ的形成而具有了类似α分泌酶的作用。BACE2与BACE1相互拮抗，竞争同一作用底物APP，从而抑制Aβ的生成。用慢病毒载体介导BACE2基因转染AD模型小鼠，BACE2在神经元内高表达，小鼠脑内Aβ的沉积显著降低〔8〕。 　　1.4 γ分泌酶 γ分泌酶是一组复杂的多亚基复合体，早老素(presenilin，PS)1和PS2为同源异构体，是γ分泌酶的组分之一。PS1和PS2基因突变可使Aβ42的水平选择性升高。APP、PS1和PS2基因突变被认为与早发型AD密切相关。除PS是γ分泌酶复合体组分外，还有Nicastrin(Nct)、APH1和PEN2，任一组分表达水平下调均将导致γ分泌酶复合体形成障碍。例如，用siRNA抑制细胞PS1的表达，γ分泌酶活性下降的同时，细胞中Aβ4