毕赤酵母GS115菌种.PDF

天 CAT#:12-154 净 低温运输 ，-80℃保存 沙 系 列 毕赤酵母GS115 菌种 Pichia pastoris Strain GS115 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦 506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 GS115 是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素 例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培 养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细 菌的污染和生长。GS115 毕赤酵母自身表型为Mut+ ，但是GS115 转化株既 + 能够产生出 Mut 菌株，也能够产生出Muts 菌株。目的蛋白在这两种转化株 的表达水平可能是不同的，幵且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到 最好的酵母表达方案。 毕赤酵母适宜的生长温度是28 至30 度，温度超过32 度对蛋白的表达是 有害的，幵可能导致细胞的死亡。GS115 毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4 基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷， 因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸 8 野生型的概率一般低于10 。GS115 毕赤酵母可以在YPD 培养基中生长，或 者在补充有组氨酸的 minimal media 中生长，但是无法在单独的 minimal media 培养基中生长。 + 本菌株的基因型为His4 ，表型是Mut 。 规格及成分 成份 编号 塑料袋包装 毕赤酵母GS115 12-154 1 mL 使用手册 1 份 运输及保存 低温运输 ，-80℃保存，有效期一年。 自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等 使用方法 质粒转化毕赤酵母GS115 的菌株的方法有很多，如电转化、化学转化等。 根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方 法。 1. 挑取酵母单菌落 ，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中， 30℃ ，250-300 r/min 培养过夜； 2. 取100-500 µL （≤1:100 ）的培养物接种至含有50 mL 新鲜培养基的200 mL 三角摇瓶中，28~30℃ ，250-300 r/min 培养过夜(约20 小时) ，至 OD600 达到1.3~1.5 ； 3. 将细胞培养物于4℃，1500g 离心5 分钟 ，用50 mL 的冰预冷的无菌水 将菌体沉淀重悬； 4. 按步骤3 离心，用25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬； 5.