阿仑磷酸钠和辛伐他汀对体外培养成骨细胞的影响.docVIP

　　阿仑磷酸钠和辛伐他汀对体外培养成骨细胞的影响 作者：崔维顶　李煜明　魏新程 【摘要】 目的 探讨辛伐他汀和阿仑磷酸钠对体外培养成骨细胞的影响。方法 分离3周龄成骨细胞，体外培养时以辛伐他汀和阿仑磷酸钠刺激，观察成骨细胞碱性磷酸酶水平和成骨细胞增殖率。结果 辛伐他汀、阿仑磷酸钠可以促进成骨细胞增殖，增加碱性磷酸酶的分泌，二者共同作用后作用更显著。结论 辛伐他汀和阿仑磷酸钠能促进成骨细胞增殖和分泌碱性磷酸酶，可以联合作用促进骨形成。 　　【关键词】辛伐他汀；阿仑磷酸钠；成骨细胞 　　Effect of alendronate sodium and simvastatin on osteoblasts cultured in vitro 　　 　　【Abstract】 Objective To study the effect of alendronate sodium and simvastatin on osteoblasts cultured in vitro． Methods Three ulated vastatin, proliferation ratio and alkaline phosphatase (ALP)activity and simvastatin not only promoted proliferation of osteoblasts， but also stimulatedALPactivity, bination of both drugs had a significant effect． Conclusion Alendronate sodium and simvastatin can promote proliferation and ALP activity of osteoblasts, ote the form of bone． 　　【Key vastatin；Alendronate sodium；Osteoblast 　　 　　骨质疏松症已成为威胁老年人的多发病，阿仑磷酸钠是 治疗 骨质疏松的常见药物，主要作用机制是抑制破骨细胞的骨吸收，降低骨转换率。辛伐他汀主要用来治疗高脂血症，两种药物都通过抑制胆固醇代谢中的甲羟戊酸途径发挥作用，因此学者们发现辛伐他汀对骨代谢也有一定的影响。阿仑磷酸钠和辛伐他汀联合作用如何影响成骨细胞呢。本实验中笔者观察阿仑磷酸钠和辛伐他汀对体外培养成骨细胞的影响，进一步探索两种药物对骨代谢的作用。 　　1 材料与方法 　　1．1 材料 3周龄SD大鼠（南京医科大学实验动物中心），DMEM-F12培养基、胎牛血清（美国Hyclone公司），HEPES、谷氨酰胺、阿仑磷酸钠、辛伐他汀（美国Sigma公司），CO 2 培养箱（LB-7，日本池本理化 工业 株式会社），胰蛋白酶、MTT（美国Sigma公司）。 　　1．2 成骨细胞的培养 无菌条件下取大鼠颅盖骨，剪碎至1 mm 3 大小，用PBS液充分冲洗。先后用0．25%胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化，离心去上清，沉淀的细胞加入含15％胎牛血清的DMEM-F12培养液，吹打成细胞悬液。细胞计数板计数，调整细胞浓度为1×10 5 /ml，接种于25 cm 2 培养瓶，37℃、5％ CO 2 饱和湿度的孵箱内培养，换液1次/3 d，当细胞在培养瓶中生长汇合后传代。 　　1．3 碱性磷酸酶染色 将二代成骨细胞计数，以1×104/孔的密度接种于6孔培养板，DMEM-F12培养液培养。经过4 d左右，细胞生长接近铺满培养板底部后，吸去培养液，用PBS缓冲液冲洗，以95％无水酒精固定10 min。吸去固定液，三蒸水冲洗3遍，每孔迅速加入2 μl 1×AP反应缓冲液、100 μl NBT（nitro blue tetrazolium）溶液和50 μl BCIP（5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate）溶液，混匀，室温下放置30 min，PBS漂洗数次。晾干后镜下观察，-20℃保存。 　　1．4 药物对成骨细胞增值率的影响 将二代成骨细胞以密度为5×10 3 /孔接种于96孔培养板上。待其贴壁后，小心吸去培养液，将含各种浓度阿仑磷酸钠和辛伐他汀的DMEM-F12培养液0．2 ml加入到培养板，浓度分别为阿仑磷酸钠 1×10 -6 、1×10 -7 、1×10 -8 、1×10 -9 mol/L和辛伐他汀1×10 -6 、1×10 -7 、1×10 -8 、1×10 -9 mol/L组，DMEM-F12为阴性对照组，每组6个孔。放于孵箱培养72 h，各孔加入MTT液，20 μl/孔，轻轻吹打，继续培养4 h。吸出孔内培养液后，加入DMSO